Description
معرفی رنگ آمیزی گرم
GRAM stain kit
فهرست مطالب
کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان و پادتن طب
کاربرد: جهت ضدعفونی و پاکسازی دست و سطوح .
تستا عرضه کننده مواد مصرفی بهداشتی و آزمایشگاهی و الکل متیلیک طبی ۷۰ درصد
برند: کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان – ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب
حجم: ۴ بسته ۱۰۰ میلی لیتری
قیمت :
کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان = ۵۸۰۰۰ تومان
ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب = ۱۵۰۰۰ تومان
رنگ آمیزی گرم چیست؟
در سال ۱۸۸۴ هانس کریستین گرم، یک باکتری شناس دانمارکی، تلاش کرد یک رنگ آمیزی جهانی پیدا کنید که بتوان آن را در مورد همه باکتری ها به کار برد. در این فرآیند، او کشف کرد که باکتری‌ها را می‌توان به دو گروه مختلف تقسیم کرد، یکی که رنگ بر روی آن باقی می ماند (“گرم مثبت”) و رنگ آمیزی دیگر که رنگ باقی نمی ماند (“گرم منفی”).
روش منحصر به فرد این باکتری شناس برای شناسایی این دو گروه – “روش گرم” – اولین گام در فرآیند شناسایی باکتری شد.
باکتری های گرم مثبت یا گرم منفی می تواند پزشک را در تشخیص دقیق باکتری ها راهنمایی کند، زیرا باکتری های مختلف باعث بیماری های مختلف می شوند. به عنوان مثال، باکتری که باعث مخملک می شود گرم مثبت است، در حالی که عامل ایجاد حصبه یا وبا گرم منفی است.
علاوه بر این، این فرآیند می تواند به پزشک کمک کند تا درمان مناسبی را تعیین کند، زیرا برخی از باکتری های گرم منفی قادر به مقاومت در برابر بسیاری از آنتی بیوتیک های رایج هستند.
رنگ آمیزی گرم یک تکنیک رنگ آمیزی افتراقی است که بیشترین کاربرد را در تمام آزمایشگاه های رشته های میکروبیولوژی دارد. این رنگ آمیزی یکی از مهمترین معیارها در شناسایی برای انواع ایزوله های باکتریایی است.
به این روش رنگ آمیزی افتراقی می گویند زیرا به باکتری ها اجازه می دهد تا بر اساس ۲ معیار اصلی متمایز شوند:
شکل آنها (جفت، تتراد، گروه، زنجیره و غیره) و تمایل آنها به رنگ ها (گرم مثبت و گرم منفی).
باکتری های گرم مثبت دارای دیواره سلولی شبکه ای ضخیم هستند که از پپتیدوگلیکان (۵۰ تا ۹۰ درصد پوشش سلولی) ساخته شده اند و با حضور معرف کریستال ویولت به رنگ بنفش در می‌آیند، در حالی که باکتری‌های گرم منفی لایه نازک‌تری دارند (۱۰ درصد از پوشش سلولی)، بنابراین رنگ بنفش را حفظ نمی کنند و توسط سافرانین به رنگ صورتی در می آیند.
باکتری های گرم مثبت آبی تا بنفش و سلول های گرم منفی صورتی تا قرمز به نظر می رسند.
مراحل رنگ آمیزی گرم
انجام برخی از مراحل فرآیند رنگ آمیزی گرم سخت است لذا برای تمرین، ایده خوبی است که یک اسلاید “کنترلی” درست کنید.
سعی کنید مقداری باکتری را از بین دندان های خود جمع آوری کنید (با استفاده از خلال دندان) و آن را روی یک لام با یک قطره آب قرار دهید.
اگر روش رنگ آمیزی گرم به درستی انجام شود، اسلاید شما باید ترکیبی از سلول های گرم منفی و گرم مثبت و همچنین مقداری نوتروفیل (گلبول های سفید خون) با هسته های صورتی داشته باشد.
بعد از اینکه آن را امتحان کردید، باکتری ها را از خاک یا برخی از آنها که در پتریدیش پرورش می دهید آزمایش کنید.
فرایند رنگ آمیزی
- لام میکروسکوپ شیشه ای را استریل کنید. اگر شیشه لام کثیف است، آن را با آب و صابون بشویید تا چربی و کثیفی از بین برود. لام را با اتانول، شیشه پاک کن یا هر روشی که آزمایشگاه شما توصیه می کند ضد عفونی کنید.
- با قرار دادن مقدار کمی باکتری روی یک لام شیشه ای تمیز، یک نمونه اسمیر تهیه کنید. یک اسلاید دیگر بردارید و از لبه آن برای خراش دادن یا “اسمیر کردن” نمونه به یک لایه بسیار نازک از مواد استفاده کنید.
- اجازه دهید نمونه روی لام با هوا خشک شود و سپس با عبور دادن حرارت آن را ثابت کنید( ۳-۴ بار از داخل شعله عبور دهید). (هنگام لمس اسلاید نباید داغ باشد و هنگام عبور از شعله هرگز نباید توقف کنید) اینکار باعث می شود نمونه در طول رنگ آمیزی به راحتی شسته نشود.
- لام را روی سینی لکه گیری قرار دهید. سینی رنگ آمیزی یک ظرف فلزی، شیشه ای یا پلاستیکی کم عمق است که یک توری کوچک یا تکیه گاه سیمی در بالای آن قرار دارد. لام را روی این تکیه گاه قرار دهید تا مایعاتی که استفاده می کنید در سینی تخلیه شوند.
- نمونه را با ۱-۲ قطره از معرف کریستال ویولت به مدت ۶۰ ثانیه پوشش دهید. و سپس به آرامی آن را با آب به آهستگی بشویید.
- crystal violet (CV) در محلول های آبی به یون های CV+ و کلرید (Cl-) تجزیه می شود. این یون ها از طریق دیواره سلولی و غشای سلولی در هر دو سلول گرم مثبت و گرم منفی نفوذ می کنند. یون CV+ با اجزای دارای بار منفی سلول های باکتریایی برهمکنش می کند تا سلول ها را بنفش رنگ کند.
- نمونه را با چند قطره ید گرم به مدت ۶۰ ثانیه تثبیت کنید و سپس به آرامی نمونه را مانند مرحله ۳ بشویید.
- ید، به شکل یون های دارای بار منفی، با CV+ برهمکنش انجام می دهد و کمپلکس های بزرگی از کریستال ویولت-ید (کمپلکس های CV-I) را در لایه های داخلی و خارجی سلول تشکیل می دهد. این کار رنگ بنفش کریستال ویولت را در سلول، هر کجا که رنگ دارد ، به دام می‌اندازد.
ید خورنده است. از استنشاق، بلع یا تماس پوستی خودداری کنید.
- از الکل اتیلیک یا استون به عنوان حلال استفاده کنید. اسلاید (لام) را به صورت زاویه دار نگه دارید و الکل را از بالای نمونه قطره قطره روی اسلاید بریزید ، به طوری که الکل در کل نمونه پایین بیاید. هنگامی که مایعی که از لبه لام خارج می شود دیگر رنگی نیست استفاده از الکل را متوقف کنید. نازک ترین قسمت های اسمیر باید بی رنگ باشد.
- این مرحله کمتر از ۱۰ ثانیه طول می کشد یا حتی اگر رنگ‌زدای حاوی غلظت‌های بالاتر استون باشد، زمان کمتری نیز طول می‌کشد. هرچه استون بیشتر باشد، رنگ‌زدا سریع‌تر عمل می‌کند و به زمان‌بندی دقیق‌تری نیاز دارد. لام را دوباره به آرامی بشویید. توجه داشته باشید که سلول های گرم مثبت مقداری از رنگ بنفش را حفظ می کنند، اما اکثر رنگ ها توسط حلال شسته می شود.
- این حساس ترین مرحله است، زیرا اگر الکل اتیلیک به مدت طولانی روی نمونه باقی بماند، سلول های گرم مثبت و همچنین سلول های گرم منفی را بی رنگ می کند.
- دیواره سلولی سلول های گرم منفی حاوی غلظت بالایی از لیپیدهای محلول در الکل است. سفید کننده لیپیدها را حل می کند و اجازه می دهد رنگ از سلول کشیده شود. نفوذپذیری دیواره سلولی را افزایش می دهد و به کمپلکس کریستالی بنفش-ید اجازه می دهد تا از سلول خارج شود. حلال باعث کم آبی دیواره سلول گرم مثبت، بسته شدن منافذ و به دام افتادن لکه در داخل سلول می شود.
- نمونه را با چند قطره معرف سافرانین یا فوشسین بپوشانید و به مدت ۶۰ ثانیه رنگ بزنید و سپس یک بار دیگر به آرامی بشویید. از این معرف ها در یک نمونه میکروسکوپی برای ایجاد پس‌زمینه متضاد یا برای شفاف‌تر کردن تمایز بین انواع مختلف بافت استفاده می‌شود.
- فوشسین بسیاری از باکتری های گرم منفی مانند گونه های هموفیلوس و لژیونلا را با شدت بیشتری رنگ می کند. که ممکن است گزینه بهتری برای مبتدیان باشد.
- در مرحله بعد اسلاید را با کاغذ جاذب خشک کنید. در این مرحله اسلاید می تواند با میکروسکوپ مورد بررسی قرار گیرد.
- میکروسکوپ نوری را آماده کنید. لام را زیر میکروسکوپ نوری قرار دهید. اندازه باکتری ها بسیار متفاوت است، بنابراین کل بزرگنمایی مورد نیاز از ۴۰۰x تا ۱۰۰۰x متفاوت خواهد بود. در انتهای بالاتر این بزرگنمایی ها، یک لنز شیئی غوطه ور در روغن برای وضوح بیشتر توصیه می شود.
- برای جلوگیری از ایجاد حباب، یک قطره روغن غوطه‌ور را روی لام قرار دهید، از حرکت در حین استفاده اجتناب کنید. لنز میکروسکوپ را حرکت دهید تا عدسی شیئی در جای خود قرار گیرد و روغن را لمس کند.
- غوطه ور شدن روغن را فقط می توان روی لنزهایی با طراحی خاص استفاده کرد، نه لنزهای “خشک”.
نتایج رنگ آمیزی به شیوه گرم
زمانی که عمل رنگ آمیزی به کمک کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان یا ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب انجام شد، نتایج قابل بررسی و استنتاج است.
باکتری‌های بی‌رنگ (باکتری‌های گرم منفی) به رنگ قرمز یا صورتی در می‌آیند (در این سلول‌ها، کریستال ویولت توسط الکل اتیلیک شسته شده و سافرانین جایگزین شده است) و باکتری‌های بنفش یا آبی (باکتری‌های گرم مثبت) بدون تغییر رنگ باقی می‌مانند. باکتری های گرم مثبت به دلیل کریستال ویولت که در دیواره های سلولی ضخیم آنها به دام افتاده است، آبی تا بنفش به نظر می رسند.
ارگانیسم های گرم مثبت: بنفش رنگ تا آبی
ارگانیسم های گرم منفی: رنگ قرمز مایل به صورتی
- اگر نمونه خیلی ضخیم باشد، ممکن است نتایج مثبت کاذب را مشاهده کنید.
- اگر همه انواع باکتری ها گرم مثبت هستند، نمونه جدیدی را رنگ آمیزی کنید تا مطمئن شوید که نتیجه درست است.
- اگر رنگ‌زدایی بیش از حد طول کشید، ممکن است نتایج منفی کاذب مشاهده کنید.
- در صورتی که همه انواع باکتری ها گرم منفی هستند، نمونه جدیدی را رنگ آمیزی کنید و نتایج خود را دوباره بررسی کنید.
- نتایج کاذب رنگ آمیزی گرم ممکن است مربوط به نمونه های جمع آوری ناکافی یا تاخیر در حمل و نقل باشد.
- رعایت دقیق فرایند و معیارهای تفسیری برای نتایج دقیق مورد نیاز است.
فرایند رنگ آمیزی (مراحل تغییر رنگ)
مرحله | باکتری های Gram-Positive | باکتری های Gram-Negative |
Specimen before stain | No color | No color |
Crystal violet stain | Blue | Blue |
Iodine stain | Purple | Purple |
Solvent | Purple | No color |
Counter stain | Purple | Red |
تصاویر مرجع را می توانید جستجو کنید
اگر مطمئن نیستید که باکتری چیست، به مجموعه ای از تصاویر مرجع که بر اساس شکل و نتیجه رنگ گرم مرتب شده اند نگاه کنید.
می‌توانید پایگاه‌های اطلاعاتی را به صورت آنلاین در پایگاه ملی داده‌های پاتوژن میکروبی و بسیاری از سایت‌های دیگر پیدا کنید.
شناسایی باکتری های گرم
https://testafa.com/شناسایی باکتری های گرم مثبت بر اساس شکل:
باکتری ها بر اساس شکل، زیر میکروسکوپ بیشتر به صورت کوکسی (کروی) یا میله ای (اسوانه ای) طبقه بندی می شوند. در اینجا چند باکتری گرم مثبت رایج (رنگ بنفش) که بر اساس شکل سازماندهی شده اند آورده شده است:
کوکسی های گرم مثبت عموماً یا استافیلوکوک (به معنی کوکسی در خوشه) یا استرپتوکوک (به معنای کوکسی در زنجیره) هستند.
باکتری های میله ای گرم مثبت شامل باسیلوس، کلستریدیوم، کورینه باکتریوم و لیستریا هستند. باکتریActinomyces spp میله ای اغلب دارای شاخه ها یا رشته هایی هستند.
شناسایی باکتری های گرم منفی:
باکتری های گرم منفی (رنگ صورتی) اغلب به سه گروه طبقه بندی می شوند. کوکسی ها باکتری های کروی هستند، باسیل ها باکتری های بلند و نازکی هستند و باسیل های کوکوئید جایی در این بین قرار دارند.
کوکسی های گرم منفی معمولاً گونه های نایسریا هستند.
باسیل های گرم منفی عبارتند از E. coli، Enterobacter، Klebsiella، Citrobacter، Serratia، Proteus، Salmonella، Shigella، Pseudomonas و بسیاری دیگر.
Vibrio cholerae می تواند به صورت باسیل های معمولی یا باسیل های خمیده ظاهر شود.
باسیل های گرم منفی “کوکوئید” (یا “کوکوباسیل ها”) شامل بوردتلا، بروسلا، هموفیلوس و پاستورلا هستند.
ارزیابی نتایج ترکیبی :
رنگ‌آمیزی دقیق برخی باکتری‌ها به دلیل شکنندگی یا مومی بودن دیواره‌های سلولی آنها دشوار است.
این باکتری ها ممکن است ترکیبی از رنگ بنفش یا صورتی در یک سلول یا در بین سلول های مختلف در یک اسمیر داشته باشند.
هر نمونه باکتری بیش از ۲۴ ساعت می تواند این مشکل را داشته باشد، اما رنگ آمیزی برخی گونه ها در هر سنی دشوار است و ممکن است به آزمایش‌های تخصصی‌تری برای محدود کردن شناسایی نیاز داشته باشند، مانند رنگ آمیزی اسید فست، مشاهده رشد کشت، کشت‌های محیط TSI یا آزمایش ژنتیکی.
Actinomyces، Arthobacter، Corynebacterium، Mycobacterium و Propionibacterium spp همگی باکتری های گرم مثبت در نظر گرفته می شوند، اما اغلب رنگ قطعی ندارند.
رنگ آمیزی گرم برای باکتری های کوچک و باریک مانند ترپونما، کلامیدیا و گونه های ریکتزیا دشوار است.
احتیاط و ایمنی در استفاده از کیت رنگ آمیزی گرم
هنگام کار با کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان و یا ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب نکات و موارد زیر را مورد توجه قرار دهید:
موارد احتیاط:
- اغلب مواد شیمیایی مورد استفاده برای تهیه اسلاید ممکن است سمی، خورنده یا خطرات دیگری به همراه داشته باشند.
- استون و اتانول قابل اشتعال هستند. استون چربی را از دست‌های شما پاک می‌کند و باعث می‌شود پوست شما مواد شیمیایی دیگر را راحت‌تر جذب کند. دستکش بپوشید و با احتیاط استفاده کنید.
- اجازه ندهید اسمیر قبل از اینکه لکه یا ضد لکه را بشویید خشک شوید.
- معرف های موجود باعث تغییر رنگ لباس و پوست می شود.
- درب بطری های مواد شیمیایی را همیشه محکم نگه دارید به جز برای مدت کوتاهی که در حال اندازه گیری مواد شیمیایی هستید.
- باکتری هایی که با آنها کار می کنید نیز می توانند خطرناک باشند.
- همیشه قبل و بعد از دست زدن به کشت های باکتری دست های خود را به خوبی بشویید.
- هنگامی که بررسی یک محیط کشت به اتمام رسید ، به روی ظرف محیط کشت به اندازه کافی سفیدکننده بریزید تا روی آن پوشیده شود سپس آن را در یک کیسه پلاستیکی ببندید و دور بیندازید.
- این یکی از مهمترین معیارها در هر طرح شناسایی برای انواع ایزوله های باکتریایی است.
- مکانیسم های مختلفی برای توضیح واکنش گرم پیشنهاد شده است.
- تفاوت های فیزیولوژیکی زیادی بین دیواره سلولی گرم مثبت و گرم منفی وجود دارد.
- از زمانی که کریستین گرام رنگ آمیزی گرم را کشف کرد، این فرآیند به طور گسترده مورد بررسی و بازتعریف قرار گرفته است.
- کاربر باید با اتوکلاو کردن و/یا سوزاندن فرآورده های استفاده شده یا غیرقابل استفاده این محصول از دفع ایمن اطمینان حاصل کند.
- از روش های آزمایشگاهی تعیین شده در دفع مواد عفونی و موادی که با بالینی در تماس هستند استفاده کنید.
- نمونه باید مطابق با تکنیک های آزمایشگاهی موجود آلوده زدایی و دفع شود.
تجهیزات ایمنی اولیه عبارتند از:
- عینک ایمنی
- دستکش های مقاوم در برابر مواد شیمیایی
- روپوش آزمایشگاهی مقاوم در برابر مواد شیمیایی
- تهویه مناسب محیط
نوع نمونه
- نمونه های بالینی – خون، ادرار، CSF، چرک، زخم ها، ضایعات، بافت های بدن، خلط و غیره.
- نمونه های مواد غذایی و لبنیات
- نمونه های آب
محدودیت ها :
- از نتایج حاصل از رنگ آمیزی گرم در ارتباط با سایر یافته های بالینی و آزمایشگاهی استفاده کنید.
- از روش‌های اضافی (مانند رنگ آمیزی های خاص، گنجاندن محیط‌های انتخابی و غیره) برای تأیید یافته‌های پیشنهاد شده توسط اسمیرهای رنگ‌آمیزی گرم استفاده کنید.
کنترل کیفیت
- بررسی نتایج رنگ آمیزی گرم به صورت میکروسکوپی انجام می شود.
- دقت آزمایش به شدت به آموزش و مهارت میکروسکوپیست ها بستگی دارد.
- حساسیت رنگ آمیزی گرم ۱۰۵ سلول در میلی لیتر یا در صورتی که نمونه با سیتوسانتریفیوژ تهیه شده باشد ۱۰۴ است.
- این امر به ویژه برای اسمیر یک قطره ادرار، که در آن میانگین یک سلول باکتریایی در هر بار معاینه ۲۰ مجموعه است با مقدار >= 105 cfu/ml مطابقت دارد.
ذخیره سازی و نگهداری
- در دمای ۳۰-۱۰ درجه سانتیگراد در ظرف در بسته و دور از نور شدید نگهداری شود.
- قبل از تاریخ انقضا بروی برچسب استفاده شود.
- هنگام باز کردن، محصول باید به درستی در محل تهویه خشک و محافظت شده از دمای شدید و منابع اشتعال نگهداری شود.
کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان یا ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب را به راحتی از تستا شاپ تهیه نمایید.
- T J Beveridge - Mechanism of gram variability in select bacteria (Mechanism of gram variability in select bacteria - PubMed (nih.gov))
- Clinical Microbiology Procedures Handbook 4ed
- TEXtBOOK Diagnostic Microbiology 4ed
- Davies JA, Anderson GK, Beveridge TJ, Clark HC (November 1983). "Chemical mechanism of the Gram stain and synthesis of a new electron-opaque marker for electron microscopy which replaces the iodine mordant of the stain". Journal of bacteriology 156 (2): 837–۴۵.
- Bergey, David H.; John G. Holt; Noel R. Krieg; Peter H.A. Sneath (1994). Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (9th ed.). Lippincott Williams & Wilkins.
- Gram, HC (1884). "Über die isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten" (in German). Fortschritte der Medizin 2: 185–۹.
- Isenberg, H.D. (ed). 1995. Essential Procedures for clinical Microbiology. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
- Isenberg, H.D. (ed). 1992. Clinical Microbiology Procedures Handbook . American Society for Microbiology, Washington, D.C.
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
testa_admin –
سلام
لطفاً نظرات و تجربیات خود را در استفاده از کیت رنگ آمیزی گرم بهار افشان و همچنین ست رنگ آمیزی گرم پادتن طب برای استفاده سایر دوستان به اشتراک گذارید.
با سپاس – شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا)
Kamali –
سلام ، از کیفیت و نحوه ارسال این محصول قدردانی می گردد.
testa_admin –
همکاری با شما مایه افتخار است