Description
معرفی کیت سنجش فنیل آلانین
PKU Test
فروش کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان
کاربرد: یک سنجش آنزیمی برای اندازه‌گیری کمی L- فنیل آلانین در لکه‌های خونی نوزادان (برای غربالگری فنیل کتونوری در نوزادان).
برند: کیمیا پژوهان
محتویات: معرف های شماره ۱ تا ۴، پلیت استخراج ۹۶ خانه، پلیت شفاف فتومتری ۹۶ خانه، نوارهای کاغذ صافی با لکه های خونی استاندارد.
قیمت : ۱۱۹۰۰۰ تومان
شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا)، کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان را معرفی و عرضه می نماید.
برای خرید کیت PKU در تستا شاپ ثبت سفارش نمایید.
فهرست مطالب
کیت PKU چیست؟
در زیر کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان ، اصطلاح دیگری برای فنیل آلانین هیدروکسیلاز، آورده شده است. در انسان، این پروتئین توسط ژن PAH کدگذاری می شود. این ژن در گونه های دیگر از جمله موش، موش صحرایی، گورخرماهی، قورباغه، نماتد، مرغ نیز حفظ شده است.
طول این پروتئین ۴۵۲ اسید آمینه با جرم ۵۱.۹ کیلو دالتون گزارش شده است. این یکی از اعضای خانواده اسید آمینه هیدروکسیلاز معطر وابسته به Biopterin است. نام های دیگر این پروتئین ممکن است شامل PH باشد.
کاربرد کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان
یک سنجش آنزیمی برای اندازه‌گیری کمی L- فنیل آلانین در لکه‌های خونی نوزادان (برای غربالگری فنیل کتونوری در نوزادان).
PKU چیست؟
فنیل کتونوری (PKU) یکی از شایع ترین بیماری های ارثی متابولیسم اسیدهای آمینه است. این بیماری به صورت اتوزومی مغلوب به نوادگان با شیوع حدوداً ۱:۲۶۰۰ تا ۱:۲۵۰۰۰ وابسته به گروه جمعیت مشاهده شده منتقل می شود. علت اصلی بیماری (۹۰ تا ۹۹ درصد موارد) کاهش یا عدم فعالیت می باشد.
کمپلکس آنزیمی فنیل آلانین هیدروکسیلاز که مسئول تبدیل اسید آمینه ضروری فنیل آلانین به تیروزین است. دومی پیش ساز کاتکولامین ها، ملانین و هورمون های تیروئید است. به دلیل مسدود شدن این متابولیسم، فنیل آلانین از طریق یک مسیر جایگزین برای فنیل پیرووات و استات که از طریق کلیه ها دفع می شوند، تبدیل می شود. این بیماری با عقب ماندگی ذهنی بیماران در هفته های اول زندگی آشکار می شود.
مسئول این پیشرفت، میلینیزاسیون نامناسب نورون های مغز به دلیل تغییر در متابولیسم پروتئین است. از دیگر علائم فنیل کتونوری فقدان رنگدانه درم و اکسس آن به دلیل اختلال در سنتز ملانین و در نتیجه مستعد ابتلا به بیماری های پوستی است. تشخیص فنیل کتونوری در نوزادان مهم است زیرا با رژیم غذایی کم فنیل آلانین می توان از آسیب مغزی جلوگیری کرد. بنابراین یک تست غربالگری برای تشخیص افزایش
غلظت فنیل آلانین در خون باید بین روز سوم و پنجم زندگی نوزاد ایجاد شود. اگر این آزمایش مثبت باشد، یک آزمایش تاییدی برای تشخیص جهش‌های خاص در کروموزوم ۱۲ انجام می‌شود. تست‌های غربالگری بسیاری برای پایش بیماران از نظر فنیل کتونوری توسعه داده شد. اولین موردی که برای مخترعش Guthrie نامیده شد، بر پایه خنثی کردن یک عامل بازدارنده رشد باسیلوس سوبتیلیس توسط سطوح بالای فنیل آلانین است.
به دلیل برخی از معایب این روش، آن را با سنجش هایی که در آن فنیل آلانین موجود در خون بیماران در یک واکنش شیمیایی شرکت می کند، جایگزین می شود و یک ماده فلورسین کننده یا رنگی ایجاد می کند که می تواند به صورت کمی اندازه گیری شود. روش ها را می توان راحت تر در مقایسه با روش پیچیده تر و گران تر HPLC استفاده کرد.
فنیل آلانین لکه های خون با استفاده از اسید تری کلراستیک (۳ درصد) از کاغذ سلولزی به صورت کمی شسته می شود. پس از آن فنیل آلانین توسط آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز به فنیل پیرووات تبدیل می شود. این واکنش با کاهش کوآنزیم NAD+ موجود در مخلوط واکنش همراه است. NADH کاهش یافته در یک واکنش ردوکس نمک تترازولیوم اضافه شده را به سوبسترای زرد رنگ Formazan تبدیل می کند. مقدار فورمازان تولید شده متناسب با غلظت فنیل آلانین در نمونه است. رنگ زیرلایه را می توان با فتومتر ۴۵۰ نانومتر اندازه گیری کرد.
میانگین شیوع PKU در سراسر جهان ۱:۱۵۰۰۰ است و از کشوری به کشور دیگر بسته به پیشینه قومی جمعیت متفاوت است.
این یک نقص متابولیک است که در آن بیماران فاقد مقدار کافی آنزیم فنیل آلانین هیدروکسیلاز (E.C. 1.14.16.1) هستند که تبدیل فنیل آلانین به تیروزین را کاتالیز می کند. افزایش غلظت فنیل آلانین و متابولیت های مربوط به آن در خون و سایر مایعات بدن نوزادان با رشد مناسب مغز تداخل می کند و منجر به عقب ماندگی ذهنی پیشرونده می شود.
این فرآیند را می توان با تشخیص زودهنگام و محدودیت فوری فنیل آلانین رژیم غذایی جلوگیری کرد زیرا تاخیرها با افزایش شدت عقب ماندگی ارتباط داد.
استفاده در نظر گرفته شده
کیت غربالگری فنیل کتونوری کیمیا پژوهان (PKU) یک آزمایش رنگ سنجی مبتنی بر آنزیم است که برای تعیین کمی غلظت فنیل آلانین در نمونه های خون نوزاد جمع آوری شده بر روی کاغذ جمع آوری نمونه Whatman 903 طراحی شده است.
این آزمایش برای غربالگری نوزادان از نظر PKU/hyperphenylalaninemia مناسب است. نتایج بالا تاییدی تشخیصی PKU/hyperphenylalaninemia نیست، اما نشان دهنده ضرورت مطالعه بیشتر نوزادان برای این اختلالات است.
سایر روش های غربالگری فنیل آلانین
جدای از روش آنزیمی، سه روش غربالگری دیگر که در حال حاضر در سرتاسر جهان برای تعیین سطح فنیل آلانین خون در نوزادان مورد استفاده قرار می گیرد عبارتند از: (۱) سنجش مهار باکتری گاتری (BIA)4. (2) روش فلورسانس با استفاده از نین هیدرین ۵ و (۳) توده پشت سر هم
طیف سنجی (MS/MS)6. دو روش اول از تداخل آنتی بیوتیک ها رنج می برند که منجر به داده های منفی کاذب و مثبت کاذب به ترتیب برای روش های BIA و فلورسانس می شود. اگرچه روش MS/MS کاملاً خودکار، دارای حساسیت بالا و عاری از هرگونه تداخل است، اما به تجهیزات و کنترل های داخلی پرهزینه و همچنین پرسنل بسیار آموزش دیده برای آن نیاز دارد.
اصل سنجش در کیت سنجش فنیل آلانین
کیت غربالگری PKU کیمیا پژوهان از یک فنیل آلانین دهیدروژناز میکروبی نوترکیب مهندسی شده (PheDH) (E.C. 1.4.1.20) برای کاتالیز کردن دآمیناسیون اکسیداتیو فنیل آلانین خون با استفاده از NAD+ به عنوان کوفاکتور استفاده می کند.
NADH تشکیل شده توسط سیستم واکنش دیافوراز/تترازولیوم جفت شده به NAD+ تبدیل می شود که از مهار محصول جلوگیری می کند و تعادل واکنش دهیدروژناز را فشار می دهد.
تقریباً ۱۰۰٪ تکمیل شده است. استفاده از Diaphorase مهندسی منحصر به فرد Enzolve امکان ایجاد یک روش رنگ سنجی ساده، تک مرحله ای، سریع، دقیق و حساس را برای تعیین فنیل آلانین خون فراهم کرده است.
فرمول های واکنش های مرتبط با PKU در زیر مشاهده می گردد:
آزمایش با کیت PKU
فنیل آلانین لکه های خون به طور کمی با استفاده از اسید تری کلرواستیک (۳٪) از کاغذ سلولزی شسته می شود. پس از آن، فنیل آلانین توسط آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز به فنیل پیرووات تبدیل می شود. این واکنش با کاهش کوآنزیم NAD+ موجود در مخلوط واکنش همراه است. NADH کاهش یافته در یک واکنش ردوکس نمک تترازولیوم زرد اضافه شده را به سوبسترای بنفش فرمازان تبدیل می کند. مقدار فرمازان تولید شده متناسب با غلظت آن است
فنیل آلانین در نمونه رنگ زیرلایه را می توان با فتومتر در ۵۷۰ نانومتر اندازه گیری کرد.
هشدارها و اقدامات احتیاطی
- فقط برای استفاده تشخیصی in vitro. فقط برای استفاده حرفه ای
- قبل از شروع آزمایش، دستورالعمل ها را به طور کامل و با دقت بخوانید. از نسخه معتبر درج بسته ارائه شده به همراه کیت استفاده کنید. مطمئن باشید که همه چیز قابل درک است.
- در صورت آسیب شدید به بسته کیت، لطفاً حداکثر یک هفته پس از دریافت کیت، به صورت کتبی با IBL یا تامین کننده خود تماس بگیرید. در اجرای آزمایشی از قطعات آسیب دیده استفاده نکنید، اما آنها را برای مشکلات مربوط به شکایت ایمن نگه دارید.
- از شماره لات و تاریخ انقضا پیروی کنید. معرف های لات های مختلف را با هم مخلوط نکنید. از معرف های تاریخ مصرف گذشته استفاده نکنید.
- از دستورالعمل های آزمایشگاهی خوب و دستورالعمل های ایمنی پیروی کنید. در صورت لزوم از کت های آزمایشگاهی، دستکش های لاتکس یکبار مصرف و عینک های محافظ استفاده کنید.
- معرف های این کیت حاوی مواد خطرناک ممکن است باعث تحریک چشم و پوست شود. برای جزئیات به مواد ارائه شده و برچسب ها مراجعه کنید.
- مواد شیمیایی و معرف های آماده یا استفاده شده باید طبق دستورالعمل ها یا مقررات ملی خطرات زیستی و ایمنی به عنوان زباله های خطرناک رفتار شوند.
- تمام معرف های این کیت حاوی سرم یا پلاسمای انسانی آزمایش شده و از نظر آنتی ویروس I/II، HBsAg و ضد HCV منفی بوده است. با این حال، وجود این یا سایر عوامل عفونی را نمی توان به طور مطلق منتفی کرد. به همین دلیل، معرف ها باید به عنوان خطرات زیستی بالقوه در استفاده و دفع در نظر گرفته شوند.
ذخیره سازی و پایداری
کیت غربالگری PKU کیمیا پژوهان در دمای محیط ارسال می شود و باید در دمای ۲-۸ درجه سانتی گراد نگهداری شود. دور از گرما یا نور مستقیم خورشید نگهداری شود. ذخیره و پایداری نمونه ها و معرف های آماده شده در فصل های مربوطه بیان شده است.
جمع آوری و ذخیره سازی نمونه لکه های خون
خون از پاشنه نوزاد تازه متولد شده باید فقط از قسمت داخلی یا جانبی سطح کف پا جمع آوری شود. پاشنه پا را قبلا با یک دستمال یا حوله ولرم ( دمای ۴۰ تا ۴۱ درجه) گرم کنید تا جریان خون در محل افزایش یابد. احتیاط های معمول برای جمع آوری خون باید رعایت شود. پس از سوراخ شدن پاشنه پا، اولین قطره خون باید با گاز استریل پاک شود.
کارت جمع آوری ( کارت گاتری) را در برابر یک قطره آویزان بزرگ خون لمس کنید و اجازه دهید در یک مرحله مقدار کافی خون در کاغذ صافی خیس شود و دایره از پیش چاپ شده را کاملا پر کند. این روش را تکرار کنید تا تعداد مورد نیاز دایره های از پیش چاپ شده را روی کارت مجموعه پر کنید.
کارت را بصورت افقی روی مکان مسطحی قرار دهید. اجازه دهید لکه های خون به مدت ۳ ساعت در دمای اتاق به دور از نور مستقیم خورشید در هوا خشک شوند.
کارت های خونی را می توان برای یک هفته در پاکت های مقاوم به رطوبت نگهداری نمود. لکه های خون در پاکت های پلاستیکی زیپ دار و حاوی سیلیکاژل در دمای ۴ تا ۸ درجه یخچال تا دو ماه و در فریزر ( دمای منفی ۲۰) به مدت طولانی پایدار خواهد ماند.
اجزای کیت غربالگری PKU کیمیا پژوهان
محتویات | مقدار |
معرف شماره ۱، تامپون استخراج | ۲۰ میلی لیتر |
معرف شماره ۲، سوبسترا | ۵ میلی لیتر |
معرف شماره ۳ ، آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز در محیط تامپونه | ۵ میلی لیتر |
معرف شماره ۴، محلول رنگزا | ۵ میلی لیتر |
پلیت استخراج ۹۶ خانه | ۱ عدد |
پلیت شفاف فتومتری ۹۶ خانه | ۱ عدد |
نوارهای کاغذ صافی با لکه های خونی استاندارد * | ۲ عدد |
· حاوی شش غلظت و لکه های خونی جهت کنترل در دو غلظت نرمال و آنرمال، خشک شده بر کاغذ صافی مخصوص | |
جدول۱: محتویات کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان
روش کار با کیت سنجش فنیل آلانین:
- یک دیسک خونی به قطر ۵ میلی متر از نمونه های بیمار، کنترل و استاندارد را به درون حفره های میکروپلیت مخصوص استخراج بیاندازید. بهتر است هر نمونه دوبار مورد آزمایش قرار گیرد.
- پلیت نمونه ها، کنترل و استاندارد را بر روی پایه ای در داخل بن ماری در دمای ۹۰-۹۵ درجه قرار داده و درب بن ماری را ببندید. ( دقت نمایید که قطره آب له داخل حفره های ریخته نشود) ۱۰ دقیقه منتظر بمانید تا لکه خون بر روی کاغذ تثبیت گردد.
- در دادمه در داخل هر کدام از حفره ها ۱۵۰ میکرولیتر معرف شماره ۱ ریخته تا فنیل آلانین وارد خون گردد. دقت نمایید که تامپون روی دیسک ها را کاملا بپوشاند و از تشکیل حباب هوا در حفره ها حلوگیری گردد.
- روی پلیت را با چسب مخصوص پوشانده و به مدت یک ساعت بر روی شیکر دورانی با سرعت مناسب تکان دهید.
- نکته: در صورتیکه عمل تثبیت لکه در مرحله اول به درستی انجام شده باشد محلول استخراج کاملا شفاف دیده می شود.
- ۱۰۰ میکرولیتر از محلول استخراج شده از نمونه ها را به حفره های هم شماره خود در میکرو پلیت شفاف اضافه نمایید.
- بسته به مقدار مورد نیاز به حجم مساوی از معرف های ۲و ۳ و۴ را مخلوط نمایید. این مخلوط فقط ۵ دقیقه پایدار می باشد.
- ۱۵۰ میکرولیتر از این مخلوط را به درون هر حفره بریزید.
- روی پلیت را با چسب مخصوص پوشانده و به مدت یک ساعت بر روی شیکر دورانی با سرعت مناسب تکان دهید.
- جذب نوری را در فاصله ۱۰ دقیقه در طول موج ۴۹۰ نانومتر (فیاتر رفرانس ۶۳۰ نانومتر) اندازه گیری نمایید.
محاسبه نتیجه آزمایش:
با رسم منحنی استاندارد ( غلظت در مقابل جذب نوری) نمونه های مجهول را تعیین مقدار کنید.
منحنی استاندارد به صورت شکل زیر می باشد:
محدوده طبیعی ( حد رفرانس):
به منظور تعیین محدوده طبیعی، غلظت فنیل آلانین خون در ۲۵۰ نوزاد ۱ تا ۴ روزه اندازه گیری و نتایج آن در زیر نشان داده شده است:
Phe (mg/dl) | در نوزادان ۱=۴ روزه |
۳.۹ | بالاترین حد |
۱.۲ | پایین ترین حد |
۱.۸ | متوسط مقادیر |
(± ۰.۱) | SD |
جدول ۲: محدوده طبیعی فینل آلانین – حد مرجع کیت سنجش فنیل آلانین
بر اساس یافته ها غلظت طبیعی پیشنهادی برای فنیل آلانین (cut off point) کمتر از ۴ mg/dl یا ۰.۲۴ mmol/lخواهد بود. از نوزادانی که فنیل آلانین آنها بیش از حد طبیعی است باید مجداا خونگیری و آزمایش تکرار گردد.
ارزیابی های کیت غربالگری PKU کیمیا پژوهان:
اختصاصیت : عملکرد آنزیم بصورت (Cross reactivity) نسبت به اسیدهای آمینه دیگر ناچیز بوده و در مورد تیروزین کمتر از ۰.۱% می باشد.
حساسیت: حساسیت روش برابر ۰.۵ mg/dl می باشد.
بازیابی: در غلظت های مختلف یکسان و بیش از ۹۰ درصد است.
دقت درون سیستمی (Intra Assay): حاصل از انجام ۲۰ تست تکراری برای دو غلظت مختلف ۱ mg/dl و ۶mg/dl به صورت زیر می باشد:
غلظت مورد نیاز | ±SD | CV% |
۱ mg/dl | ۰.۰۸ | ۱۱ |
۶ mg/dl | ۰.۴۲ | ۷.۶ |
جدول ۳: دقت کیت PKU
دقت بین سیستمی (Inter Assay): حاصل از انجام ۸ بار تست ذو بار تکرار برای دو غلظت مختلف ۱ mg/dl و ۶mg/dl به صورت زیر می باشد:
غلظت مورد نیاز | ±SD | CV% |
۱ mg/dl | ۰.۱۴ | ۱۲.۷ |
۶ mg/dl | ۰.۶۵ | ۹.۸ |
جدول ۴: دقت کیت PKU
جهت انتخاب کیت سنجش فنیل آلانین، استفاده از کیت الایزا PKU کیمیا پژوهان توصیه می گردد.
تستا عرضه کننده انواع کیت های آزمایشگاهی و لوازم مصرفی آزمایشگاهی و کیت سنجش فنیل آلانین
- Scriver CR, Kaufman S. (2002) in: The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Diseases (Scriver C.R., Beaudet A.L., Sly W.S, Valle D., Childs, B, Kinzler, K.W., Vogelstein, B. eds.) VIII edition. McGraw Hill, 1667
- Waisbren SE, Mahon BE, Schnell RR, Levy HL (1987) Pediatrics 79:351
- Smith L, Beasley MG, Ades AE (1990) Arc
- Richtlinien des Bundesausschusses der Ärzte und Krankenkassen über die Früherkennung von Krankheiten bei Kindern bis zur Vollendung des 6. Lebensjahres („Kinder-Richtlinien“) BAnz. Nr. 60 (2005)
- Rouse, B. et al. Maternal phenylketonuria syndrome: congenital heart defects, microcephaly and developmental outcomes. J. Pediat. 136: 57 – ۶۱ (۲۰۰۰)
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
Reviews
There are no reviews yet.