محیط کشت ای وان مدیوم ایبرسکو

محیط کشت براث ای‌۱ (A1 Medium)

محیط کشت ای وان مدیوم A1 Medium یک محیط غنی‌سازی انتخابی برای تشخیص سریع کلیفرم‌های مدفوعی است که زمان آزمایش را از ۷۲ ساعت در روش‌های سنتی به ۲۴ ساعت کاهش می‌دهد و نیاز به مرحله پیش‌غنی‌سازی را حذف می‌کند. این محیط حاوی هضم‌کننده پانکراسی کازئین به عنوان منبع غنی نیتروژن، ویتامین‌ها و فاکتورهای رشد است. لاکتوز و سالیسین منابع کربوهیدرات را فراهم می‌کنند. کلرید سدیم فشار اسمزی را تنظیم کرده و تریتون X-100 به عنوان یک سورفکتانت برای پراکنده‌سازی سلول‌های باکتریایی عمل می‌کند. اصل انتخابی این محیط بر پایه کشت در دمای بالا (۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد) استوار است؛ در این دما، کلیفرم‌های مدفوعی (عمدتاً E. coli) قادر به رشد و تخمیر لاکتوز با تولید گاز هستند، در حالی که بسیاری از باکتری‌های غیرمدفوعی مهار می‌شوند. روش استاندارد شامل انکوباسیون اولیه در ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳ ساعت و سپس انتقال به حمام آب ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۱ ± ۲ ساعت است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایش‌های میکروبیولوژی آب و فاضلاب و کنترل کیفیت مواد غذایی برای شمارش کلیفرم‌های مدفوعی با روش MPN می‌باشد. واکنش مثبت به صورت تولید گاز در لوله دورهام و کدورت محیط مشاهده می‌شود.

مشخصات کلیدی محیط کشت ای وان مدیوم

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی برای کلیفرم‌های مدفوعی.
• هدف کشت: تشخیص و شمارش کلیفرم‌های مدفوعی و اشریشیا کلی در آب، فاضلاب و مواد غذایی با روش MPN.
• حالت فیزیکی: پودر کرم‌رنگ تا زرد روشن، همگن.
• ترکیبات کلیدی (گرم/لیتر): هضم‌کننده پانکراسی کازئین (۲۰.۰)، لاکتوز (۵.۰)، کلرید سدیم (۵.۰)، سالیسین (۰.۵)، تریتون X-100 (۱.۰ میلی‌لیتر).
• میزان مصرف: ۳۱.۵ گرم در لیتر آب مقطر.
• pH نهایی: ۶.۹ ± ۰.۱ در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد.
• شرایط استریلیزاسیون: اتوکلاو در ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۰ دقیقه.
• شرایط انکوباسیون: ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳ ساعت (احیاء)، سپس ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۱ ± ۲ ساعت در حمام آب.
• خوانش نتیجه: مثبت: تولید گاز در لوله دورهام و کدورت محیط. منفی: عدم تولید گاز و شفاف بودن محیط.
• کنترل کیفیت: Escherichia coli: رشد خوب همراه با تولید گاز (مثبت). Enterobacter aerogenes: رشد ضعیف تا خوب اما بدون تولید گاز (منفی).
• کاربرد اصلی: تشخیص سریع کلیفرم‌های مدفوعی در آب آشامیدنی، آب دریا، فاضلاب تصفیه‌شده و مواد غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت ای وان مدیوم A1 Medium محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک و دور از رطوبت و نور مستقیم نگهداری شود. پودر مرطوب‌کننده است؛ پس از هر بار استفاده، درب ظرف محکم بسته شود. برای تهیه محیط، ۳۱.۵ گرم پودر را در یک لیتر آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم و همزدن مداوم به جوش آورید تا کاملاً حل شود. سپس در لوله‌های حاوی لوله دورهام وارونه به میزان ۱۰ میلی‌لیتر توزیع کرده و در اتوکلاو با دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۰ دقیقه استریل کنید. کنترل دقیق دمای انکوباسیون در ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد حیاتی است و باید از حمام آب با دمای کنترل‌شده استفاده شود. انکوباسیون اولیه ۳ ساعته در ۳۷ درجه سانتی‌گراد برای احیای باکتری‌های آسیب‌دیده ضروری است. تولید گاز حتی در یک لوله دورهام نشان‌دهنده مثبت بودن آن رقت است. برای تأیید نهایی E. coli، می‌توان از محیط‌های افتراقی مانند آگار EMB یا تست IMViC استفاده کرد. محیط آماده را می‌توان به مدت کوتاه در دمای ۲-۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد.