محیط کشت آرژینین دی هیدرولاز براث

محیط کشت براث دی هیدرولاز آرژینین (Arginine Dihydrolase Broth)

محیط کشت Arginine Dihydrolase Broth بر اساس توانایی برخی از باکتری‌ها در هیدرولیز آرژینین به سیترولین و سپس به اورنیتین و آمونیاک از طریق مسیر آنزیمی دیهیدرولاز کار می‌کند. آزاد شدن آمونیاک نهایی باعث قلیایی شدن محیط می‌گردد. این محیط معمولاً حاوی آرژینین، پپتون، نمک‌های معدنی و یک شناساگر pH (اغلب فنول رد) است. برخی فرمولاسیون‌ها حاوی یک مقدار جزئی کربوهیدرات نیز هستند تا متابولیسم اولیه باکتری را تضمین کنند.

تست آرژینین دیهیدرولاز یک معیار تشخیصی کلیدی، به ویژه در شناسایی باکتری‌های غیرتخمیری (Non-fermenters) مانند اعضای جنس Pseudomonas است. برای مثال، Pseudomonas aeruginosa معمولاً نتیجه مثبت (تولید قلیا) می‌دهد، در حالی که Pseudomonas fluorescens اغلب منفی است. این تست همچنین در سیستم‌های شناسایی مانند API 20NE برای تفکیک گونه‌های مختلف کاربرد گسترده‌ای دارد. محیط کشت Arginine Dihydrolase Broth در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی و محیطی برای شناسایی دقیق پاتوژن‌های فرصت‌طلب و باکتری‌های مهم از نظر اپیدمیولوژیک استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، بیوشیمیایی/تشخیصی
• هدف کشت: تشخیص آنزیم آرژینین دیهیدرولاز (ADH) در باکتری‌ها، به ویژه باکتری‌های غیرتخمیری گرم‌منفی
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، L-آرژینین، نمک‌های معدنی، شناساگر pH (معمولاً فنول رد)
• شرایط کشت: لوله‌های محیط اغلب با یک لایه روغن معدنی پوشانده می‌شوند تا شرایط بی‌هوازی نسبی برای فعال شدن برخی از مسیرهای آنزیمی ایجاد شود.
• شرایط انکوباسیون: 35 تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد (برای باکتری‌های مزوفیل) یا ۳۰ درجه سانتی‌گراد (برای برخی سودوموناس‌ها) به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت، گاهی تا ۴ روز.
• خوانش نتیجه: مثبت: تغییر رنگ شناساگر به قرمز یا صورتی پررنگ (قلیایی شدن). منفی: عدم تغییر رنگ یا تغییر به زرد (اسیدی شدن). رنگ نارنجی میانی ممکن است نیاز به انکوباسیون طولانی‌تر داشته باشد.
• کنترل کیفیت: مثبت: Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)، منفی: Acinetobacter baumannii.
• کاربرد اصلی: تفکیک گونه‌های سودوموناس و سایر باکتری‌های غیرتخمیری گرم‌منفی در تشخیص میکروبیولوژی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت Arginine Dihydrolase Broth باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. محیط آماده شده مایع را می‌توان در لوله‌های کوچک تقسیم و استریل نمود. توصیه می‌شود بلافاصله پس از سرد شدن محیط، یک لایه حدود ۱۰ میلی‌متری روغن معدنی استریل روی آن اضافه شود. لوله‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چندین هفته نگهداری کرد. برای تلقیح از کشت تازه ۱۸-۲۴ ساعته باکتری روی یک محیط غیرانتخابی (مانند بلاد آگار یا TSA) استفاده شود. پس از تلقیح، لوله به آرکی تکان داده می‌شود. تفسیر رنگ باید در مقایسه با یک لوله کنترل تلقیح نشده و تحت نور طبیعی انجام گیرد. برای گونه‌های کندرشد، خوانش نتایج ممکن است تا ۴ روز طول بکشد.