محیط کشت برد پارکر آگار بیس

محیط کشت پایه آگار بیرد پارکر (Baird Parker Agar Base)

محیط کشت Baird Parker Agar Base فرمولاسیونی است که خاصیت انتخابی و تشخیصی قوی خود را مدیون ترکیب عوامل بازدارنده و نشانگر است. پایه محیط حاوی پپتون، عصاره گوشت و پیروات سدیم است که رشد استافیلوکوک‌ها را تحریک می‌کند. خاصیت انتخابی بالا ناشی از افزودن مکمل حاوی تلوریت پتاسیم و زرده تخم‌مرغ است. تلوریت توسط بیشتر باکتری‌ها به شکل سمی احیا می‌شود، اما استافیلوکوک‌های کواگولاز مثبت (مانند S. aureus) به آن مقاوم‌ترند و آن را به تلوریم احیا می‌کنند که باعث ایجاد کلونی‌های سیاه تا خاکستری می‌شود. زرده تخم‌مرغ نیز دو فعالیت آنزیمی را آشکار می‌سازد: لیپاز (که یک هاله شفاف براق در اطراف کلونی ایجاد می‌کند) و کواگولاز (که یک منطقه کدر و مات از رسوب پروتئین در اطراف کلونی ایجاد می‌کند).

این محیط به طور گسترده در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی غذایی برای ردیابی Staphylococcus aureus به عنوان شاخص آلودگی و خطر مسمومیت غذایی کاربرد دارد. کلونی‌های典型的 S. aureus روی این محیط، سیاه (به دلیل احیای تلوریت)، براق (به دلیل فعالیت لیپاز) و اغلب با یک منطقه شفاف باریک (هاله لیپاز) و یک منطقه کدر درست اطراف کلونی (هاله کواگولاز) دیده می‌شوند. این ویژگی‌های مورفولوژیک منحصر به فرد، شناسایی اولیه قابل اعتمادی را فراهم می‌کند. محیط کشت Baird Parker Agar (پایه + مکمل) در بسیاری از استانداردهای ملی و بین‌المللی مواد غذایی به عنوان روش مرجع ذکر شده است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، پایه انتخابی/تشخیصی بسیار قوی (نیازمند مکمل)
• هدف کشت: جداسازی، شمارش و شناسایی اولیه Staphylococcus aureus از نمونه‌های غذایی، محیطی و بالینی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر و اتوکلاو، سپس افزودن مکمل تخم‌مرغ-تلوریت استریل)
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره گوشت، پیروات سدیم، گلیسین، لیتیم کلرید، آگار
• مکمل ضروری: امولسیون زرده تخم‌مرغ و تلوریت پتاسیم (معمولاً به صورت آماده یا با اضافه کردن جداگانه).
• شرایط کشت: پس از افزودن مکمل، محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. کشت به صورت سطحی انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۵ تا ۴۸ ساعت. بازرسی کلونی‌ها در ۲۴ و ۴۸ ساعت توصیه می‌شود.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک S. aureus: سیاه تا خاکستری-سیاه (به دلیل احیای تلوریت)، براق، و اغلب با دو منطقه: یک منطقه شفاف باریک (هاله لیپاز) که گاهی خارج از یک منطقه کدر و مات نزدیک به کلونی (هاله کواگولاز) قرار می‌گیرد. سایر استافیلوکوک‌ها ممکن است سیاه باشند اما فاقد هاله‌های مشخص هستند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های Typical با Staphylococcus aureus (ATCC 25923). عدم رشد یا رشد بسیار ضعیف با Escherichia coli (ATCC 25922).
• کاربرد اصلی: روش مرجع برای شمارش Staphylococcus aureus در مواد غذایی (مانند گوشت، شیر، فرآورده‌های لبنی، غذاهای دریایی)، لوازم آرایشی و نمونه‌های محیطی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Baird Parker Agar Base باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو کردن محیط پایه، باید آن را تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد خنک کرده و سپس تحت شرایط استریل، مکمل تخم‌مرغ-تلوریت (که معمولاً به صورت استریل تهیه شده یا فیلتر-استریل می‌شود) را اضافه نمود. مخلوط کردن کامل و بدون ایجاد حباب بسیار مهم است. پلیت‌های آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در کیسه‌های پلاستیکی بسته به مدت حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند و سطح آنها خشک باشد. برای نمونه‌های غذایی، معمولاً از روش کشت سطحی استفاده می‌شود. انکوباسیون به مدت ۴۸ ساعت برای ظهور کامل هاله‌ها ضروری است. تفسیر هاله‌ها گاهی نیاز به تجربه دارد و استفاده از نور مایل (زاویه دار) می‌تواند به مشاهده هاله شفاف لیپاز کمک کند. کلونی‌های مشکوک سیاه و براق که هاله ندارند نیز می‌توانند S. aureus باشند (سویه‌های منفی لیپاز یا کواگولاز ضعیف). تایید نهایی با تست کواگولاز لوله‌ای (کوآگولاز پلاسمایی) بر روی کلونی‌های مشکوک الزامی است. پلیت‌های استفاده شده حاوی تلوریت باید مطابق مقررات دفع ضایعات خطرناک معدنی دور ریخته شوند.