محیط کشت برد استافیلوکوک انریچمنت براث بیس

محیط کشت پایه براث غنی‌کننده استافیلوکوک بیرد (Baird Staphylococcus Enrichment Broth Base)

محیط کشت Baird Staphylococcus Enrichment Broth Base به عنوان مرحله اولیه غنی‌سازی در پروتکل‌های جداسازی Staphylococcus aureus از مواد غذایی طراحی شده است. این محیط پایه حاوی ترکیبات غنی‌کننده‌ای مانند پپتون، عصاره مخمر و پیروات سدیم است که پیروات به عنوان یک آنتی‌اکسیدان عمل کرده و به خنثی‌سازی پراکسیدهای تولیدشده در طی متابولیسم هوازی کمک می‌کند، در نتیجه احیای استافیلوکوک‌های آسیب‌دیده حرارتی یا استرس‌دیده را تقویت می‌نماید. خاصیت انتخابی محیط با افزودن مکمل تلوریت پتاسیم کامل می‌شود که رشد بسیاری از باکتری‌های رقیب را مهار می‌کند، در حالی که استافیلوکوک‌های کواگولاز مثبت معمولاً نسبت به آن تحمل بیشتری نشان می‌دهند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت مواد غذایی، به ویژه برای نمونه‌هایی است که احتمال دارد S. aureus در آنها به تعداد کم وجود داشته یا در اثر فرآیندهای حرارتی آسیب دیده باشد (مانند غذای کنسروی با فرآوری ناکافی، خشک‌بار، ادویه‌جات). پس از دوره انکوباسیون در این براث غنی‌کننده، یک لوپ از کشت بر روی یک محیط انتخابی-تشخیصی جامد (معمولاً Baird Parker Agar) کشت می‌شود تا کلونی‌های مشکوک جداسازی و شناسایی شوند. این روش دو مرحله‌ای (غنی‌سازی مایع + کشت جامد) حساسیت تشخیص را به میزان قابل توجهی افزایش می‌دهد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، پایه غنی‌کننده/انتخابی (نیازمند مکمل)
• هدف کشت: غنی‌سازی اولیه و احیای انتخابی Staphylococcus aureus از نمونه‌های غذایی پیچیده
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر، سپس اتوکلاو و افزودن مکمل استریل تلوریت پتاسیم)
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، پیروات سدیم، گلیسین، لیتیم کلرید
• مکمل ضروری: محلول استریل تلوریت پتاسیم.
• شرایط کشت: محیط در لوله‌ها یا ظروف درب‌دار مناسب ریخته می‌شود. نمونه غذایی معمولاً با نسبت ۱:۱۰ به محیط اضافه می‌گردد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه (مرحله غنی‌سازی): رشد در این مرحله معمولاً به صورت کدورت عمومی مشاهده می‌شود. وجود S. aureus با کشت مجدد بر روی محیط جامد (مثلاً Baird Parker Agar) و مشاهده کلونی‌های Typical تایید می‌شود. انکوباسیون بیش از ۴۸ ساعت ممکن است منجر به رشد بیش از حد فلور پس‌زمینه مقاوم شود.
• کنترل کیفیت: غنی‌سازی موفق و قابلیت بازیابی Staphylococcus aureus (ATCC 25923) از یک نمونه غذایی آلوده‌سازی شده (Spiked). مهار رشد باکتری‌های رقیب مانند Escherichia coli.
• کاربرد اصلی: مرحله غنی‌سازی در پروتکل‌های استاندارد (مانند ISO 6888) برای تشخیص Staphylococcus aureus در مواد غذایی با حساسیت بالا.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Baird Staphylococcus Enrichment Broth Base باید در جای خشک نگهداری شود. پس از تهیه و اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن، محلول استریل تلوریت پتاسیم تحت شرایط استریل اضافه می‌شود (معمولاً به غلظت نهایی ۰.۰۰۵٪). از آنجایی که تلوریت در برابر حرارت تجزیه می‌شود، هرگز نباید به محیط داغ اضافه شود. محیط آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت محدود نگهداری کرد. قبل از استفاده، محیط باید به دمای اتاق رسانده شود. حجم نمونه غذایی اضافه شده به محیط غنی‌کننده و نسبت آن بر اساس استاندارد مربوطه (مانند ۱۰ گرم نمونه در ۹۰ میلی‌لیتر محیط) انجام می‌گیرد. پس از انکوباسیون، حتی اگر کدورت واضح نباشد، کشت مجدد بر روی محیط جامد انتخابی انجام می‌شود، زیرا ممکن است رشد محدود باشد. برای افزایش حساسیت، گاهی از روش “غنی‌سازی دو مرحله‌ای” استفاده می‌شود که در آن پس از ۲۴ ساعت انکوباسیون، یک لوپ به یک لوله تازه از همان محیط منتقل می‌شود. کلیه ضایعات حاوی تلوریت باید به عنوان ضایعات شیمیایی خطرناک دفع شوند. این محیط صرفاً برای اهداف غنی‌سازی طراحی شده و تفسیر نهایی فقط بر اساس رشد روی محیط جامد انتخابی انجام می‌گیرد.