محیط کشت بایل اسکولین آگار 1

محیط کشت آگار اسکولین صفرا (Bile Esculin Agar)

محیط کشت Bile Esculin Agar دو تست مهم را به طور همزمان انجام می‌دهد: تحمل به صفرا (نمک‌های صفراوی) و هیدرولیز اسکولین. وجود نمک‌های صفراوی (بایل) در محیط به عنوان عامل انتخابی عمل کرده و از رشد بسیاری از باکتری‌های حساس به صفرا (مانند بیشتر استرپتوکوک‌های همولیتیک گروه A) جلوگیری می‌کند. باکتری‌های مقاوم به صفرا (مانند انتروکوک‌ها، استرپتوکوک‌های گروه D و برخی انتروباکترها) قادر به رشد هستند. اسکولین یک گلیکوزید است که اگر توسط باکتری هیدرولیز شود، گلوکز و اسکولتین آزاد می‌گردد. اسکولتین با یون‌های آهن (فریک سیترات) موجود در محیط کمپلکس تشکیل داده و باعث سیاه شدن ناحیه اطراف کلونی و اغلب کل محیط می‌شود.

این محیط به طور گسترده در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی برای شناسایی اولیه انتروکوک‌ها (که معمولاً هر دو تست را مثبت می‌کنند) و نیز در میکروب‌شناسی غذایی برای شناسایی و افتراق Listeria monocytogenes (که معمولاً هیدرولیز اسکولین مثبت اما تحمل به صفرا در این غلظت متغیر است) کاربرد دارد. نتیجه مثبت به صورت رشد همراه با سیاه شدن محیط (نصف یا کل شیب آگار) تعبیر می‌شود. نتیجه منفی به معنای عدم رشد یا رشد بدون سیاه شدن است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی
• هدف کشت: شناسایی باکتری‌های مقاوم به صفرا و هیدرولیزکننده اسکولین (معمولاً انتروکوک‌ها، استرپتوکوک‌های گروه D و Listeria)
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو). اغلب به صورت شیب‌دار (Slant) در لوله استفاده می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره گوشت، نمک‌های صفراوی (بایل)، اسکولین، سیترات فریک، آگار
• شرایط کشت: محیط در لوله به صورت شیب عمیق (Deep Slant) یا در پلیت ریخته می‌شود. کشت به صورت خطی بر روی سطح شیب یا به صورت نقطه‌ای در پلیت انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. خوانش نتایج در ۲۴ و ۴۸ ساعت صورت می‌پذیرد.
• خوانش نتیجه: مثبت: رشد همراه با سیاه شدن واضح ناحیه اطراف خط کشت یا کل محیط (بیش از نیمی از محیط). منفی: عدم رشد یا رشد بدون سیاه شدن (محیط به رنگ قهوه‌ای روشن اولیه باقی می‌ماند).
• کنترل کیفیت: مثبت: Enterococcus faecalis (ATCC 29212) – رشد و سیاه شدن. منفی: Streptococcus pyogenes (ATCC 19615) – عدم رشد یا رشد بسیار ضعیف و بدون سیاه شدن.
• کاربرد اصلی: شناسایی انتروکوک‌ها و استرپتوکوک‌های گروه D در میکروبیولوژی بالینی، و غربالگری Listeria در میکروبیولوژی غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت Bile Esculin Agar باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو، محیط را می‌توان در لوله‌ها به صورت شیب عمیق جامد کرد. شیب‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. برای کشت، یک کلونی جدا شده یا مقدار کمی از کشت خالص را به صورت یک خط روی سطح شیب بکشید. از کشت سنگین خودداری کنید. در صورت استفاده از پلیت، کشت به صورت نقطه‌ای انجام می‌شود. انکوباسیون بیش از ۴۸ ساعت توصیه نمی‌شود زیرا ممکن است باکتری‌های دیگر نیز در نهایت باعث سیاه شدن کاذب شوند. سیاه شدن باید واضح و معمولاً در عرض ۲۴ ساعت برای انتروکوک‌ها اتفاق بیفتد. برخی گونه‌های غیرهدف (مانند Aeromonas، برخی Enterobacter) نیز ممکن است نتیجه مثبت بدهند، بنابراین نتیجه باید در کنار سایر تست‌های شناسایی تفسیر شود. برای افتراق Listeria از انتروکوک، تست‌های اضافی مانند تحرک و همولیزین ضروری است. نمک‌های صفراوی ممکن است مهارکننده برخی سویه‌های حساس Listeria باشند، بنابراین استفاده از محیط‌های انتخابی قوی‌تر برای غربالگری اولیه Listeria در مواد غذایی مرسوم است.