محیط کشت بولتون سلکتیو انریچمنت براث بیس 1

محیط کشت پایه براث غنی‌کننده انتخابی بولتون (Bolton Selective Enrichment Broth Base)

محیط کشت Bolton Selective Enrichment Broth Base یک محیط غنی‌کننده بسیار تخصصی است که شرایط بهینه برای احیای سلول‌های آسیب‌دیده کمپیلوباکتر و تکثیر انتخابی آن‌ها را فراهم می‌آورد. این محیط پایه حاوی ترکیبات مغذی غنی مانند عصاره گوشت، پپتون و عصاره مخمر است. عامل کلیدی در این محیط، ایجاد یک شرایط میکروآئروفیلیک قوی در طول انکوباسیون است که با افزودن مخلوطی از مواد کاهنده (مانند بیسولفیت سدیم، پیرووات سدیم و کربنات سدیم) پس از استریل‌سازی محیط پایه حاصل می‌شود. این مواد پتانسیل ردوکس محیط را کاهش داده و اکسیژن را حذف می‌کنند، در حالی که دی‌اکسیدکربن تولید می‌شود. خاصیت انتخابی با افزودن آنتی‌بیوتیک‌های مکمل (معمولاً سفوپرازون، آمفوتریسین B، تری متوپریم، وانکومایسین و سیکلوهگزیمید) به محیط پایه کامل می‌شود که این آنتی‌بیوتیک‌ها از رشد فلور باکتریایی و قارچی رقیب جلوگیری می‌کنند.

این محیط مطابق با استانداردهای بین‌المللی (مانند ISO 10272 برای مواد غذایی) به عنوان مرحله غنی‌سازی اولیه در روش‌های جداسازی کمپیلوباکتر استفاده می‌شود. نمونه غذایی هموژنیزه شده (معمولاً مرغ) به این براث تلقیح شده و پس از انکوباسیون در شرایط خاص، یک زیرکشت از آن بر روی محیط‌های انتخابی جامد (مانند Campylobacter Blood-Free Selective Agar یا mCCDA) انجام می‌گیرد. این روش دو مرحله‌ای (غنی‌سازی مایع + کشت جامد) حساسیت تشخیص را به ویژه برای نمونه‌هایی که سلول‌های کمپیلوباکتر در آنها به تعداد کم یا آسیب‌دیده هستند، به شدت افزایش می‌دهد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، پایه غنی‌کننده انتخابی بسیار تخصصی (نیازمند افزودن مکمل آنتی‌بیوتیکی و کاهنده)
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی و بازیابی Campylobacter jejuni و سایر کمپیلوباکترها
• حالت فیزیکی: پودر پایه (حل شونده در آب مقطر و اتوکلاو. سپس مکمل‌های استریل کاهنده و آنتی‌بیوتیکی اضافه می‌شود).
• ترکیبات کلیدی پایه: عصاره گوشت، پپتون، عصاره مخمر، نمک‌های معدنی
• مکمل‌های ضروری (پس از اتوکلاو): مخلوط کاهنده‌ها (سدیم بیسولفیت، سدیم پیرووات، سدیم کربنات) و مکمل آنتی‌بیوتیکی (معملاً بولتون مکمل آنتی‌بیوتیکی).
• شرایط کشت: محیط در ظروف درب‌دار (بطری یا لوله) ریخته می‌شود. حجم نمونه غذایی معمولاً ۱۰ گرم در ۹۰ میلی‌لیتر محیط است.
• شرایط انکوباسیون: ۴۱.۵ ± ۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۸ ± ۴ ساعت در شرایط میکروآئروفیلیک (معمولاً با استفاده از کیسه‌های گاز یا جار با اتمسفر اصلاح‌شده حاوی حدود ۵٪ O2، ۱۰٪ CO2 و ۸۵٪ N2).
• خوانش نتیجه (مرحله غنی‌سازی): رشد در این مرحله به صورت کدورت عمومی (که ممکن است ظریف باشد) مشاهده می‌شود. وجود کمپیلوباکتر با کشت مجدد بر روی محیط جامد انتخابی و مشاهده کلونی‌های Typical (خاکستری، فلزگونه، پراکنده) تأیید می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد و بازیابی موفق Campylobacter jejuni (ATCC 33291) از یک نمونه غذایی آلوده‌سازی شده. مهار رشد باکتری‌های رقیب مانند Escherichia coli و Proteus mirabilis.
• کاربرد اصلی: مرحله غنی‌سازی در روش‌های استاندارد جداسازی کمپیلوباکتر از مواد غذایی (به ویژه گوشت طیور)، خوراک دام و نمونه‌های محیطی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Bolton Selective Enrichment Broth Base باید در جای خشک نگهداری شود. دستور تهیه دقیق باید رعایت شود: محیط پایه پس از اتوکلاو باید به سرعت تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد خنک شود. سپس در زیر هود میکروبی و با رعایت شرایط استریل، ابتدا محلول کاهنده‌ها و بلافاصله پس از آن مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل (که معمولاً به صورت لیوفیلیزه است و باید با آب استریل بازسازی شود) اضافه گردد. محیط آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت کوتاه (۲۴-۴۸ ساعت) نگهداری کرد، اما استفاده فوری پس از آماده‌سازی توصیه می‌شود. حجم محیط در ظرف باید طوری باشد که سطح مایع نسبت به حجم ظرف زیاد باشد تا شرایط میکروآئروفیلیک بهتر ایجاد شود. نمونه غذایی باید بلافاصله پس از افزودن مکمل‌ها تلقیح شود. در طول انکوباسیون، ظروف باید کاملاً درب‌بسته باشند. پس از دوره انکوباسیون، یک لوپ از سطح مایع (جایی که کمپیلوباکترهای متحرک ممکن است تجمع یابند) یا از کل کشت، بر روی محیط جامد انتخابی کشت داده می‌شود. از آنجایی که کمپیلوباکترها به استرس اکسیداتیو حساس هستند، کاهش زمان بین مراحل و اجتناب از قرارگیری در معرض اکسیژن بسیار مهم است. تمام ضایعات حاوی کشت باید به عنوان مواد عفونی اتوکلاو شوند.