محیط کشت بریلیانت گرین آگار BGA 1

محیط کشت آگار برلیانت گرین (Brilliant Green Agar)

محیط کشت Brilliant Green Agar یک محیط انتخابی-تشخیصی کلاسیک است که خاصیت انتخابی خود را مدیون وجود برلیانت گرین، یک رنگ بازدارنده قوی، است. این رنگ رشد بیشتر باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از باکتری‌های گرم منفی روده‌ای غیرهدف (مانند Escherichia coli، Klebsiella و Enterobacter) را مهار می‌کند، در حالی به بیشتر گونه‌های سالمونلا (به جز تیفوزا و پاراتیفوزا) اجازه رشد می‌دهد. محیط همچنین حاوی لاکتوز و ساکارز (سوکروز) به عنوان منابع کربوهیدرات و فنول رد به عنوان شناساگر pH است. باکتری‌های تخمیرکننده لاکتوز یا سوکروز (مانند کلی‌فرم‌ها) اسید تولید کرده و محیط را زرد می‌کنند. سالمونلاها که معمولاً این قندها را تخمیر نمی‌کنند، محیط قلیایی را حفظ کرده و کلونی‌های قرمز تا صورتی روی زمینه زرد (اگر تخمیرکننده‌ای وجود داشته باشد) یا قرمز-نارنجی ایجاد می‌کنند.

این محیط به طور گسترده در پروتکل‌های استاندارد کنترل کیفیت مواد غذایی (مانند گوشت، تخم‌مرغ، شیر) و نیز در میکروبیولوژی دامپزشکی استفاده می‌شود. BGA اغلب به عنوان یکی از محیط‌های انتخابی در یک پنل (همراه با محیط‌هایی مانند XLD یا Hektoen Enteric Agar) پس از مرحله غنی‌سازی اولیه (مانند Tetrathionate یا Rappaport-Vassiliadis broth) به کار می‌رود تا حساسیت و ویژگی تشخیص را افزایش دهد. به دلیل خاصیت بازدارندگی قوی، برای نمونه‌های با فلور میکروبی بسیار غلیظ (مانند مدفوع یا فاضلاب) مناسب است. کلونی‌های سالمونلا روی این محیط معمولاً قرمز-صورتی، با هاله قرمز و گاهی با مرکز سیاه (به دلیل تولید H2S در صورت وجود تیوسولفات و سیترات آهن در فرمولاسیون) دیده می‌شوند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی قوی
• هدف کشت: جداسازی انتخابی گونه‌های Salmonella (غیر از تیفوزا و پاراتیفوزا)
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، ساکارز (سوکروز)، برلیانت گرین، شناساگر فنول رد، آگار. برخی فرمولاسیون‌ها حاوی تیوسولفات سدیم و سیترات فریک برای تشخیص تولید H2S نیز هستند.
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. کشت به صورت خطی از کشت غنی‌سازی شده انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. بازرسی در ۲۴ و ۴۸ ساعت ممکن است لازم باشد.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک سالمونلا: قرمز، صورتی یا سفید (عدم تخمیر قند) روی یک زمینه که ممکن است زرد (در حضور تخمیرکننده) یا قرمز-نارنجی باشد. اگر فرمولاسیون حاوی H2S-اندیکیتور باشد، ممکن است مرکز سیاه داشته باشند. کلونی‌های غیرسالمونلا (تخمیرکننده): زرد با یا بدون هاله زرد.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های قرمز/صورتی با Salmonella Typhimurium (ATCC 14028). مهار یا رشد بسیار ضعیف Escherichia coli (ATCC 25922).
• کاربرد اصلی: جداسازی سالمونلا از مواد غذایی، خوراک دام، نمونه‌های محیطی و گاهی نمونه‌های بالینی (به جز موارد مشکوک به تب تیفوئید).

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Brilliant Green Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود، زیرا برلیانت گرین به نور حساس است. محیط آماده شده را می‌توان در پلیت‌ها ریخته و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسانده شوند. برای کشت، معمولاً یک لوپ از کشت غنی‌سازی شده به صورت خطی کشت داده می‌شود. تفسیر رنگ کلونی‌ها باید تحت نور مناسب انجام شود. گونه‌های سالمونلا که سوکروز را تخمیر می‌کنند (نادر) ممکن است کلونی زرد ایجاد کنند. همچنین، Proteus spp. ممکن است به صورت کلونی‌های قرمز بدون هاله رشد کند (سواگرمن منفی). بنابراین، کلونی‌های مشکوک باید برای تأیید با تست‌های بیوشیمیایی و سرولوژیکی بیشتر بررسی شوند. این محیط برای جداسازی Salmonella Typhi و Paratyphi توصیه نمی‌شود، زیرا این گونه‌ها معمولاً توسط برلیانت گرین مهار می‌شوند. انکوباسیون بیش از ۴۸ ساعت توصیه نمی‌شود زیرا ممکن است باکتری‌های مقاوم‌تر پس‌زمینه شروع به رشد کنند. پلیت‌ها نباید در معرض نور مستقیم خورشید قرار گیرند.