محیط کشت کمپی CVA آگار 1

محیط کشت آگار کمپی سی‌وی‌ای (Campy CVA Agar)

محیط کشت Campy CVA Agar که مخفف Campylobacter Charcoal-based Selective Agar with Vancomycin, Cefoperazone and Amphotericin B است، یک محیط انتخابی بسیار موثر برای کمپیلوباکتر می‌باشد. فرمولاسیون این محیط معمولاً بر پایه ذغال فعال (Charcoal) است که مواد سمی متابولیکی را جذب کرده و سطحی تیره برای مشاهده بهتر کلونی‌ها فراهم می‌کند. خاصیت انتخابی قوی آن ناشی از ترکیب آنتی‌بیوتیک‌های سیفوپرازون، وانکومایسین و آمفوتریسین B (CVA) است که به ترتیب باکتری‌های گرم منفی (به جز کمپیلوباکتر)، گرم مثبت و قارچ‌ها را مهار می‌کنند. این محیط همچنین حاوی مواد مغذی مانند پپتون، عصاره مخمر و نمک‌های معدنی است. اغلب خون نیز به محیط اضافه می‌شود تا نیازهای تغذیه‌ای پیچیده کمپیلوباکتر و شرایط میکروآئروفیلیک را فراهم کند. برخی فرمولاسیون‌ها فاقد خون هستند (Blood-Free).

این محیط به طور گسترده در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی برای تشخیص کمپیلوباکتروز (یک علت شایع اسهال باکتریایی) از نمونه‌های مدفوع استفاده می‌شود. کلونی‌های کمپیلوباکتر روی این محیط پس از ۴۸-۷۲ ساعت انکوباسیون در شرایط میکروآئروفیلیک، به صورت صاف، خاکستری، فلزی (گاهی اوقات به رنگ خاکستری-نقرایی)، مرطوب و پراکنده دیده می‌شوند. ممکن است به صورت یک لایه نازک گسترش یابند یا کلونی‌های مجزای کوچک تشکیل دهند. محیط کشت Campy CVA Agar به دلیل خاصیت انتخابی بالا و بازدهی خوب، یکی از محیط‌های استاندارد طلایی برای این منظور محسوب می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی بسیار قوی/غنی‌کننده (گاهی حاوی خون)
• هدف کشت: جداسازی Campylobacter jejuni و Campylobacter coli از نمونه‌های بالینی (مدفوع)
• حالت فیزیکی: پودر پایه (تهیه شده در آب مقطر و اتوکلاو. سپس آنتی‌بیوتیک‌های استریل و در صورت نیاز خون اضافه می‌شود).
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، ذغال فعال (Charcoal)، نمک‌های معدنی، آگار
• مکمل‌های ضروری: آنتی‌بیوتیک‌های سیفوپرازون، وانکومایسین و آمفوتریسین B. اغلب خون گوسفند (۵-۱۰٪) نیز اضافه می‌شود.
• شرایط کشت: پس از افزودن مکمل‌ها، محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. نمونه مدفوع مستقیماً یا پس از غنی‌سازی سطحی کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۴۲ ± ۱ درجه سانتی‌گراد (برای انتخاب C. jejuni/coli) به مدت ۴۸ تا ۷۲ ساعت در شرایط میکروآئروفیلیک اجباری (۵-۶٪ O2، ۱۰٪ CO2، ۸۵٪ N2).
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک کمپیلوباکتر: خاکستری، فلزگونه (نقرایی-خاکستری)، صاف، مرطوب، پراکنده و گاهی موکوئید. ممکن است به صورت یک لایه نازک روی محیط پخش شوند. کلونی‌های غیرکمپیلوباکتر معمولاً مهار می‌شوند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های Typical توسط Campylobacter jejuni (ATCC 33291). مهار کامل یا رشد بسیار ضعیف Escherichia coli (ATCC 25922) و Enterococcus faecalis (ATCC 29212).
• کاربرد اصلی: تشخیص مستقیم کمپیلوباکتر از نمونه مدفوع در آزمایشگاه‌های بالینی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Campy CVA Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه حاوی ذغال (که باعث تیره شدن محیط می‌شود)، آن را تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد خنک کنید. سپس آنتی‌بیوتیک‌های استریل (که معمولاً به صورت محلول فیلتر-استریل یا لیوفیلیزه هستند) و در نهایت خون استریل (در صورت استفاده) را اضافه کرده و به آرامی مخلوط نمایید. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در کیسه‌های پلاستیکی بسته برای حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. نمونه مدفوع تازه (یا در محیط انتقالی Cary-Blair) مستقیماً به صورت سطحی یا به روش Streak کشت داده می‌شود. استفاده از شرایط میکروآئروفیلیک با کیسه‌های گاز مولد یا جار با اتمسفر کنترل‌شده اجباری است. انکوباسیون در ۴۲ درجه سانتی‌گراد به انتخاب C. jejuni/coli کمک می‌کند. پلیت‌ها باید حداقل ۴۸ ساعت و ترجیحاً ۷۲ ساعت انکوبه شوند. مشاهده کلونی‌ها ممکن است نیاز به نور با زاویه مناسب داشته باشد تا جلای فلزی دیده شود. کلونی‌های مشکوک باید با تست اکسیداز (مثبت) و مشاهده شکل مارپیچی و حرکت در میکروسکوپ فاز کنتراست تأیید شوند. آنتی‌بیوتیک سیفوپرازون ممکن است برخی سویه‌های مقاوم کمپیلوباکتر را مهار کند، بنابراین استفاده از یک محیط انتخابی مکمل (مانند محیط حاوی سفالوتین) توصیه می‌شود.