محیط کشت بریلیانت گرین بایل آگار BGBA 2

محیط کشت آگار برلیانت گرین صفرا (Brilliant Green Bile Agar)

محیط کشت Brilliant Green Bile Agar با ترکیب دو عامل بازدارنده قوی، برلیانت گرین (یک رنگ تری‌فنیل‌متان) و نمک‌های صفراوی (بایل)، خاصیت انتخابی بسیار بالایی را ایجاد می‌کند که به طور موثری رشد باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از گرم منفی‌های غیرهدف را مهار می‌کند. این محیط به طور خاص برای باکتری‌های خانواده Enterobacteriaceae که نسبت به این عوامل مقاوم‌تر هستند (مانند E. coli، Klebsiella، Enterobacter) مناسب است. لاکتوز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات و شناساگر فنول رد در محیط وجود دارد. باکتری‌های تخمیرکننده لاکتوز (مانند کلی‌فرم‌ها) اسید تولید کرده و باعث تغییر رنگ محیط از قرمز/نارنجی به زرد می‌شوند و اغلب با یک هاله زرد از رسوب نمک‌های صفراوی احاطه می‌گردند. کلی‌فرم‌ها روی این محیط کلونی‌های قرمز تا صورتی (در صورت عدم تخمیر یا تخمیر ضعیف) یا زرد (تخمیر قوی) ایجاد می‌کنند.

این محیط به طور سنتی و بر اساس استانداردهای قدیمی‌تر (مانند برخی روش‌های APHA برای آب) برای شمارش کلی‌فرم‌ها استفاده می‌شود. محیط کشت BGBA برای نمونه‌هایی که فلور میکروبی پس‌زمینه زیاد دارند (مانند فاضلاب، مواد غذایی با بار میکروبی بالا) مفید است. با این حال، به دلیل خاصیت انتخابی بسیار قوی، ممکن است برخی از کلی‌فرم‌های آسیب‌دیده یا حساس را نیز مهار کند، بنابراین حساسیت آن ممکن است کمتر از محیط‌های انتخابی‌تر جدیدتر (مانند m-Endo Agar) باشد. این محیط عمدتاً برای اهداف کنترل کیفیت و غربالگری اولیه به کار می‌رود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی بسیار قوی
• هدف کشت: جداسازی و شمارش کلی‌فرم‌ها و Escherichia coli در آب و مواد غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، لاکتوز، نمک‌های صفراوی (بایل)، برلیانت گرین، شناساگر فنول رد، آگار
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. نمونه (معمولاً آب یا رقت غذایی) به روش Pour Plate یا Spread Plate کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. نتایج ممکن است در ۴۸ ساعت نیز خوانده شوند.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک کلی‌فرم: معمولاً قرمز تا صورتی (اگر تخمیر لاکتوز منفی یا ضعیف باشد) یا زرد تا زرد-نارنجی (اگر لاکتوز مثبت باشند) که اغلب توسط یک هاله زرد از رسوب نمک صفراوی احاطه شده‌اند. کلونی‌های غیرکلی‌فرم معمولاً رشد نمی‌کنند یا بسیار کوچک و قرمز هستند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های Typical زرد با هاله توسط Escherichia coli (ATCC 25922). مهار رشد باکتری‌های گرم مثبت مانند Staphylococcus aureus (ATCC 25923).
• کاربرد اصلی: شمارش کلی‌فرم‌ها در آب (شرب، سطحی، فاضلاب)، شیر و برخی فرآورده‌های لبنی بر اساس روش‌های استاندارد قدیمی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Brilliant Green Bile Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. محیط آماده شده را می‌توان در پلیت‌ها ریخته و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسانده شوند. برای کشت آب، معمولاً از روش Pour Plate با حجم‌های مشخص (مانند ۱ میلی‌لیتر) یا از روش Spread Plate پس از فیلتراسیون استفاده می‌شود. به دلیل وجود نمک‌های صفراوی، محیط ممکن است کمی کدر به نظر برسد. هاله زرد اطراف کلونی‌های لاکتوز مثبت، ناشی از رسوب نمک‌های صفراوی در pH اسیدی است و یک نشانه تشخیصی کلیدی است. از آنجایی که محیط بسیار انتخابی است، ممکن است برخی سویه‌های کلی‌فرم (به ویژه Enterobacter و Klebsiella) که به صفرا یا برلیانت گرین حساس‌تر هستند، رشد نکنند. بنابراین، نتایج منفی لزوماً عدم وجود کلی‌فرم را ثابت نمی‌کند. انکوباسیون بیش از ۴۸ ساعت توصیه نمی‌شود. کلونی‌های مشکوک می‌توانند برای تأیید با تست IMViC یا تست آنزیم β-گالاکتوزیداز بررسی شوند. این محیط امروزه ممکن است در بسیاری از آزمایشگاه‌ها با محیط‌های انتخابی‌تر و اختصاصی‌تر (مانند mFC Agar برای کلی‌فرم‌های مدفوعی یا Chromogenic Agar برای E. coli) جایگزین شده باشد.