محیط کشت EC براث با MUG

محیط کشت انتخابی و تشخیصی ای‌سی با ام‌یو‌جی (EC Broth with MUG)

محیط کشت EC Broth with MUG اساساً محیط استاندارد EC Broth (حاوی تریپتوز، لاکتوز، نمک‌های صفراوی و سبز درخشان برای انتخاب کلی‌فرم‌های مدفوعی) است که با افزودن سوبسترای فلوروژنیک ۴-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide (MUG) تکمیل شده است. بیشتر سویه‌های E. coli (معمولاً بیش از ۹۷٪) آنزیم β-گلوکورونیداز را تولید می‌کنند که MUG را هیدرولیز کرده و محصول فلورسنت ۴-متیل آمبلی فرون (۴-MU) را آزاد می‌سازد. بنابراین، دو شاخص تشخیصی همزمان در این محیط وجود دارد: ۱) تولید گاز از تخمیر لاکتوز در دمای ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد (نشانه کلی‌فرم مدفوعی) و ۲) فلورسانس آبی در زیر نور UV بلند (۳۶۵ نانومتر) پس از انکوباسیون (نشانه اختصاصی‌تر برای E. coli). این محیط امکان تأیید سریع‌تر و مستقیم‌تر E. coli را بدون نیاز به بسیاری از تست‌های تأییدی ثانویه فراهم می‌آورد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت آب (شرب، سطحی، استخر) و صنایع غذایی به عنوان بخشی از روش‌های استاندارد (مانند روش EPA برای آب در ایالات متحده) برای تشخیص و تأیید E. coli در روش تخمیر چندلوله‌ای (MPN) یا روش Presence/Absence است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) انتخابی-تشخیصی برای تأیید مستقیم Escherichia coli
• هدف کشت: تأیید همزمان کلی‌فرم مدفوعی (از طریق تولید گاز) و شناسایی اختصاصی E. coli (از طریق فعالیت β-گلوکورونیداز و تولید فلورسانس)
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های تخمیر حاوی لوله دورهام توزیع و اتوکلاو می‌شود. MUG معمولاً حساس به حرارت است و ممکن است پس از اتوکلاو به صورت محلول استریل اضافه شود). محیط مایع کهربایی-سبز رنگ است.
• ترکیبات کلیدی: تریپتوز، لاکتوز، نمک‌های صفراوی، سبز درخشان، ۴-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide (MUG).
• شرایط کشت: از کشت مثبت مرحله احتمالی (Presumptive) در محیط لاکتوز براث، یک اینوکولوم (معمولاً یک لوپ) به لوله‌های EC-MUG منتقل می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۴۴.۵ ± ۰.۲ درجه سانتی‌گراد در یک حمام آب دقیقاً کنترل‌شده به مدت ۲۴ ساعت.
• خوانش نتیجه: دو مشاهده جداگانه: ۱) تولید گاز در لوله دورهام (مثبت برای کلی‌فرم مدفوعی). ۲) فلورسانس آبی در زیر نور UV بلند (۳۶۵ نانومتر) در اتاق تاریک. E. coli تأیید شده: معمولاً هم گاز و هم فلورسانس مثبت است. کلی‌فرم مدفوعی غیر E. coli: ممکن است گاز مثبت ولی فلورسانس منفی باشد. منفی: عدم گاز و عدم فلورسانس.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (گاز + فلورسانس قوی). سویه منفی برای فلورسانس: Enterobacter aerogenes ATCC 13048 (ممکن است گاز تولید کند ولی فاقد فلورسانس است).
• کاربرد اصلی: مرحله تأییدی نهایی و مستقیم برای E. coli در روش‌های استاندارد بررسی کیفیت آب (مانند روش EPA 9221F) و برخی از پروتکل‌های غذایی، که باعث صرفه‌جویی در زمان و هزینه نسبت به روش‌های تأییدی سنتی می‌شود.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر EC Broth with MUG باید در جای خشک، خنک و تاریک (به دلیل حساسیت MUG به نور) نگهداری شود. اگر MUG جداگانه اضافه می‌شود، باید به صورت محلول استریل فیلترشده پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن به حدود ۴۵ درجه سانتی‌گراد اضافه گردد. کنترل دقیق دمای انکوباسیون در ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد همچنان حیاتی است. برای خوانش فلورسانس، لوله باید در یک اتاق تاریک یا زیر یک محفظه مشاهده UV قرار گیرد. فلورسانس ممکن است در کل لوله یا فقط در اطراف رشد باکتری متمرکز باشد. توجه: تعداد کمی از سویه‌های E. coli (مانند O157:H7) ممکن است β-گلوکورونیداز تولید نکنند و بنابراین فلورسانس منفی خواهند بود (اما گاز مثبت). همچنین، برخی باکتری‌های غیر از E. coli (مانند برخی Salmonella و Shigella) نیز می‌توانند فلورسانس تولید کنند، اما معمولاً در این شرایط انتخابی رشد نمی‌کنند یا گاز تولید نمی‌کنند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون دقیق و MUG با خلوص بالا، یک محیط تشخیصی سریع و مؤثر برای پایش این پاتوژن شاخص مهم در آب و غذا فراهم می‌کند.