محیط کشت انتروکوکوسل براث

محیط کشت مایع انتخابی انتروکوکوسل براث (Enterococcosel Broth)

محیط کشت Enterococcosel Broth نسخه مایع محیط جامد انتروکوکوسل آگار است. این محیط حاوی پایه مغذی (پپتون و عصاره مخمر) به همراه اسکولین (Aesculin)، آربوتین و سیترات آهن می‌باشد. انتخاب‌گری از طریق افزودن آزید سدیم (مهارکننده باکتری‌های گرم منفی) و آنتی‌بیوتیک کانامایسین (مهارکننده بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت به جز انتروکوک) حاصل می‌شود. انتروکوک‌ها با تولید آنزیم اسکولیناز، اسکولین را هیدرولیز می‌کنند. محصول این هیدرولیز با آهن واکنش داده و یک کمپلکس سیاه-قهوه‌ای نامحلول تشکیل می‌دهد که باعث تیره یا سیاه شدن کل محیط می‌گردد. همچنین تخمیر آربوتین ممکن است باعث زرد شدن محیط شود. این تغییر رنگ آشکار، شناسایی مثبت بودن را بدون نیاز به زیرکشت اولیه در بسیاری از موارد آسان می‌سازد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت آب به عنوان یک محیط غنی‌سازی (Enrichment) و تشخیصی در روش Presence/Absence یا تخمیر چندلوله‌ای (MPN) برای انتروکوک‌های مدفوعی است. همچنین در میکروبیولوژی مواد غذایی و تشخیص بالینی برای غنی‌سازی نمونه‌های مشکوک کاربرد دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) انتخابی و افتراقی برای غنی‌سازی و شناسایی انتروکوک‌ها
• هدف کشت: غنی‌سازی، تشخیص و تأیید حضور انتروکوک‌ها در نمونه بر اساس هیدرولیز اسکولین و تغییر رنگ محیط به سیاه-قهوه‌ای
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌ها تقسیم و اتوکلاو می‌شود. آنتی‌بیوتیک انتخابی معمولاً پس از اتوکلاو اضافه می‌گردد). محیط اولیه کهربایی رنگ است.
• ترکیبات کلیدی پایه و افتراقی: پپتون، عصاره مخمر، اسکولین، آربوتین، سیترات آهن.
• ترکیبات کلیدی انتخابی: آزید سدیم، کانامایسین سولفات.
• شرایط کشت: نمونه آب (معمولاً حجم مشخصی) مستقیماً به لوله حاوی محیط اضافه می‌شود. برای نمونه‌های جامد (غذا)، یک رقت اولیه تهیه و به محیط تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. برای برخی پروتکل‌های آب، انکوباسیون ۴۸ ساعته توصیه می‌شود.
• خوانش نتیجه: مثبت (احتمال انتروکوک): تیره یا سیاه شدن کل محیط لوله (به دلیل تشکیل کمپلکس آهن-اسکولین). ممکن است همراه با کدورت (رشد) باشد. منفی: محیط به رنگ اصلی (کهربایی) باقی می‌ماند یا فقط کدر می‌شود (رشد بدون هیدرولیز اسکولین).
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (سیاه شدن محیط پس از ۲۴-۴۸ ساعت). سویه منفی: Escherichia coli ATCC 25922 (عدم سیاه شدن، احتمالاً عدم رشد به دلیل آزید سدیم).
• کاربرد اصلی: محیط غنی‌سازی-تشخیصی در روش‌های استاندارد بررسی کیفیت آب برای انتروکوک‌های مدفوعی (مطابق با استانداردهای APHA، ISO) و نیز برای غربالگری نمونه‌های غذایی و بالینی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Enterococcosel Broth باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن، محلول‌های استریل کانامایسین و آزید سدیم باید در شرایط آسپتیک اضافه شوند. آزید سدیم سمی است و هنگام کار باید از دستکش استفاده شده و از بلعیدن یا استنشاق آن جلوگیری کرد. حجم نمونه و محیط باید مطابق دستورالعمل استاندارد باشد (مثلاً در روش آب، ۱۰ میلی‌لیتر نمونه در لوله حاوی محیط دو برابر غلیظ). تغییر رنگ به سیاه-قهوه‌ای یک شاخص مثبت قوی است. با این حال، برای تأیید نهایی (به ویژه در آزمایش آب) یا به دست آوردن کشت خالص، می‌توان از محیط مثبت روی محیط جامد انتخابی (مانند Enterococcosel Agar یا Slanetz-Bartley Agar) زیرکشت داد. برخی از استرپتوکوک‌های گروه D غیرانتروکوکی نیز ممکن است اسکولین را هیدرولیز کنند، اما معمولاً توسط آنتی‌بیوتیک‌های انتخابی مهار می‌شوند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون متعادل، یک محیط غنی‌سازی قابل اعتماد با نقطه پایان واضح برای پایش این شاخص مهم آلودگی مدفوعی در آب فراهم می‌کند.