محیط کشت فراسر لیستریا سلکتیو انریچمنت براث بیس 1

محیط کشت پایه براث غنی‌سازی انتخابی لیستریا فریزر (Fraser Listeria Selective Enrichment Broth Base)

محیط کشت Fraser Broth Base یک محیط انتخابی بر پایه پپتون و عصاره مخمر است که حاوی لیتیم کلراید، اسکولین (Aesculin) و آمونیوم فریک سیترات می‌باشد. این محیط پایه، قبل از استفاده باید با افزودن مکمل آنتی‌بیوتیکی اختصاصی (معمولاً حاوی نالیدیکسیک اسید و اسفودالیم) تکمیل شود تا خاصیت انتخابی قوی خود را به دست آورد. لیتیم کلراید تحمل به نمک لیستریا را مورد استفاده قرار می‌دهد و بسیاری از باکتری‌های دیگر را مهار می‌کند. اسکولین به عنوان سوبسترای افتراقی عمل می‌کند؛ لیستریا آنزیم اسکولیناز را تولید می‌کند که اسکولین را هیدرولیز کرده و محصول آن با آهن واکنش داده و یک کمپلکس سیاه-قهوه‌ای تشکیل می‌دهد. بنابراین، رشد لیستریا و فعالیت آنزیمی معمولاً باعث تیره شدن محیط می‌شود. آنتی‌بیوتیک‌های موجود در مکمل، باکتری‌های گرم مثبت و منفی رقابتی را به طور انتخابی مهار می‌کنند. این محیط مرحله دوم (غنی‌سازی ثانویه) در روش استاندارد ISO 11290-1 برای جداسازی لیستریا است.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی مواد غذایی و کنترل کیفیت برای جداسازی و تشخیص Listeria monocytogenes و سایر گونه‌های لیستریا از محصولات غذایی (به ویژه گوشت، ماهی، لبنیات، سبزیجات آماده) و سطوح محیطی پس از مرحله پیش‌غنی‌سازی با Half Fraser Broth است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) پایه برای غنی‌سازی ثانویه انتخابی لیستریا
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی و افتراقی باکتری‌های جنس Listeria از نمونه‌های غذایی پس از پیش‌غنی‌سازی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌ها توزیع و اتوکلاو می‌شود. مکمل آنتی‌بیوتیکی پس از اتوکلاو اضافه می‌گردد). محیط پایه کهربایی رنگ است.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، لیتیم کلراید، اسکولین (Aesculin)، آمونیوم فریک سیترات، فسفات‌ها (بافر).
• مکمل ضروری (افزودنی پس از اتوکلاو): مکمل آنتی‌بیوتیکی فریزر (معمولاً حاوی نالیدیکسیک اسید (مهارکننده گرم منفی) و اسفودالیم (Acriflavine) (مهارکننده گرم مثبت)).
• شرایط کشت: پس از مرحله پیش‌غنی‌سازی ۲۴ ساعته در Half Fraser Broth، مقدار کمی (معمولاً ۰.۱ میلی‌لیتر) از آن کشت به لوله حاوی ۱۰ میلی‌لیتر Fraser Broth کامل منتقل می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: مثبت (مشکوک به لیستریا): تیره یا سیاه شدن محیط (ناشی از هیدرولیز اسکولین). این تغییر رنگ نشانه احتمالی حضور لیستریا است. منفی: عدم تغییر رنگ (محیط کهربایی باقی می‌ماند) یا تغییر رنگ ناچیز. کشت‌های مثبت (تیره) باید بر روی محیط انتخابی جامد (مانند Oxford Agar یا PALCAM Agar) برای جداسازی کلنی‌های خالص زیرکشت داده شوند.
• کنترل کیفیت: تیره شدن محیط پس از ۲۴-۴۸ ساعت انکوباسیون با سویه Listeria monocytogenes ATCC 7644. عدم تیره شدن یا عدم رشد با سویه‌های غیر لیستریا.
• کاربرد اصلی: مرحله غنی‌سازی ثانویه در روش استاندارد ISO 11290-1 برای جداسازی لیستریا از مواد غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Fraser Broth Base باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن، مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل (معمولاً به صورت محلول فیلترشده) باید در شرایط آسپتیک اضافه شود. مکمل آنتی‌بیوتیکی برای ایجاد خاصیت انتخابی قوی ضروری است. حجم انتقال از مرحله Half Fraser به Fraser کامل باید دقیقاً رعایت شود (معمولاً ۰.۱ میلی‌لیتر). تغییر رنگ به سیاه-قهوه‌ای یک نشانه قوی است، اما برخی از باکتری‌های غیر لیستریا (مانند برخی انتروکوک‌ها) نیز می‌توانند اسکولین را هیدرولیز کنند، اگرچه معمولاً توسط آنتی‌بیوتیک‌های انتخابی مهار می‌شوند. بنابراین، زیرکشت بر روی محیط جامد انتخابی برای تأیید ضروری است. دوره انکوباسیون ۴۸ ساعته ممکن است حساسیت را افزایش دهد. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون مطابق با استاندارد ISO، یک محیط پایه قابل اعتماد برای این مرحله کلیدی در تشخیص لیستریا فراهم می‌کند.