محیط کشت گلوکز بروموکرزول پرپل آگار 1

محیط کشت افتراقی گلوکز بروموکروزول پورپل آگار (Glucose Bromocresol Purple Agar)

محیط کشت Glucose Bromocresol Purple Agar یک محیط بر پایه تریپتون و عصاره مخمر است که حاوی گلوکز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات قابل تخمیر و شناساگر بروموکروزول پورپل (Bromocresol Purple) می‌باشد. تریپتون و عصاره مخمر، نیازهای نیتروژنی و فاکتورهای رشد را تأمین می‌کنند. اصل افتراق در این محیط، توانایی باکتری در تخمیر گلوکز و تولید اسید است. باکتری‌هایی که قادر به تخمیر گلوکز هستند، اسیدهای آلی تولید کرده که pH محیط را پایین می‌آورند. این کاهش pH باعث تغییر رنگ شناساگر بروموکروزول پورپل از بنفش (در pH خنثی تا قلیایی) به زرد (در pH اسیدی) در اطراف کلنی و گاهی در کل محیط می‌شود. باکتری‌هایی که گلوکز را تخمیر نمی‌کنند یا آن را به طور هوازی متابولیزه می‌کنند (تولید CO₂ و آب بدون اسید)، تغییر رنگی ایجاد نکرده و کلنی‌ها بر روی محیط بنفش رنگ باقی می‌مانند. این محیط برای افتراق گروه‌های باکتریایی مانند انتروباکتریاسه (اکثراً تخمیرکننده) از سودوموناداسه (غیرتخمیرکننده) و نیز برای بررسی تخمیر در سایر جنس‌ها مفید است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی و تحقیقاتی به عنوان یک تست ساده و سریع برای تخمیر گلوکز و کمک به شناسایی اولیه باکتری‌ها است. همچنین ممکن است برای مطالعات متابولیکی خاص استفاده شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار) افتراقی برای تست تخمیر گلوکز
• هدف کشت: تشخیص تخمیر گلوکز و تولید اسید توسط باکتری‌ها بر اساس تغییر رنگ شناساگر
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود و سپس اتوکلاو). محیط نهایی بنفش کمرنگ است.
• ترکیبات کلیدی: تریپتون (پپتون)، عصاره مخمر، گلوکز (دکستروز)، بروموکروزول پورپل، آگار.
• شرایط کشت: باکتری به صورت یک نقطه (Spot) یا خط (Streak) بر روی سطح پلیت کشت داده می‌شود تا کلنی‌های مجزا تشکیل شوند.
• شرایط انکوباسیون: دمای مناسب برای رشد باکتری (معمولاً ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد) به مدت ۱۸ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: تخمیر مثبت (تولید اسید): تغییر رنگ محیط از بنفش به زرد در اطراف و زیر ناحیه رشد باکتری. تخمیر منفی: عدم تغییر رنگ؛ محیط و کلنی‌ها بنفش باقی می‌مانند. گاهی تغییر رنگ جزئی به خاکستری یا سبز دیده می‌شود.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (زرد شدن). سویه منفی: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (بنفش باقی ماندن).
• کاربرد اصلی: تست افتراقی اولیه برای بررسی توانایی تخمیر گلوکز در شناسایی باکتری‌های گرم منفی و برخی گرم مثبت.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Glucose Bromocresol Purple Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. آماده‌سازی شامل حل کردن و اتوکلاو است. به دلیل وجود گلوکز، از حرارت‌دهی بیش از حد خودداری کنید. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در تاریکی برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. کشت باید به صورت سطحی انجام شود تا امکان مشاهده تغییر رنگ در اطراف کلنی فراهم گردد. تغییر رنگ به زرد ممکن است فقط در زیر کلنی رخ دهد، بنابراین مشاهده از زیر پلیت نیز می‌تواند مفید باشد. برخی از باکتری‌ها ممکن است ابتدا گلوکز را تخمیر کرده (زردی) و سپس با مصرف محصولات اسیدی، محیط را مجدداً قلیایی کنند (بازگشت به بنفش) که به آن واکنش “قلیایی شدن مجدد” می‌گویند. بنابراین، خوانش در زمان‌های مختلف (۲۴ و ۴۸ ساعت) توصیه می‌شود. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون دقیق، واکنش رنگ واضح و قابل تفسیری را برای این تست ساده اما مفید فراهم می‌آورد.