محیط کشت ایندول نیتریت مدیوم 1

محیط کشت ایندول نیتریت براث (Indole Nitrite Medium)

محیط کشت Indole Nitrite Medium که با نام‌های Trypticase Nitrate Broth یا Nitrate Broth for Indole نیز شناخته می‌شود، یک محیط مایع چندکاره است. اساس این محیط، یک پایه غنی از تریپتوفان (ارائه شده توسط تریپتیکاز پپتون و پپتون) است که امکان تولید آنزیم تریپتوفاناز توسط برخی باکتری‌ها را فراهم می‌کند. این آنزیم تریپتوفان را به ایندول، پیروات و آمونیاک تجزیه می‌کند. همزمان، حضور نیترات پتاسیم در محیط، سوبسترایی برای تست احیای نیترات (Nitrate Reduction Test) ایجاد می‌کند. این تست توانایی باکتری در احیای نیترات (NO₃⁻) به نیتریت (NO₂⁻) یا فرآورده‌های گازی دیگر مانند نیتروژن (N₂) را بررسی می‌نماید.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی تشخیصی، به ویژه در شناسایی اعضای خانواده انتروباکتریاسه و سایر باکتری‌های گرم منفی است. استفاده از یک محیط واحد برای دو تست رایج، در وقت و مواد صرفه‌جویی کرده و کارایی آزمایشگاه را افزایش می‌دهد. پس از انکوباسیون، به لوله کشت معرف‌های جداگانه برای تشخیص ایندول (معروف کواک یا اِهرلیخ) و نیتریت (محلول سولفانیلیک اسید و آلفا-نفتیل آمین) اضافه می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، چندکاره برای تست‌های بیوشیمیایی
• هدف کشت: انجام همزمان دو تست تشخیصی کلیدی: تست ایندول و تست احیای نیترات برای شناسایی باکتری‌ها
• حالت فیزیکی: پودر (حل شده در آب مقطر، توزیع در لوله‌ها و سپس اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: تریپتیکاز پپتون (منبع تریپتوفان)، پپتون، نیترات پتاسیم (KNO₃)، دی‌پتاسیم فسفات (بافری)
• اصول آزمون: 1) ایندول: باکتری‌های تریپتوفاناز مثبت ایندول تولید می‌کنند که با معرف کواک واکنش داده و حلقه قرمز رنگ ایجاد می‌کند. ۲) احیای نیترات: باکتری‌های حاوی آنزیم نیترات ردوکتاز، نیترات را به نیتریت احیا می‌کنند که با معرف‌های نیتریت ایجاد رنگ قرمز می‌کند. عدم رنگ‌گیری نیاز به تست تأییدی (افزودن پودر روی) دارد.
• شرایط کشت: لوله‌های محیط را با یک کلنی یا سوسپانسیون خالص از باکتری مورد آزمایش تلقیح می‌کنند.
• شرایط انکوباسیون: معمولاً ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت (گاهی تا ۴۸ ساعت برای برخی ارگانیسم‌ها).
• خوانش نتیجه: تست ایندول مثبت: تشکیل حلقه قرمز روی محیط پس از افزودن معرف کواک. تست نیتریت مثبت: ایجاد رنگ قرمز یا صورتی بلافاصله پس از افزودن معرف‌های نیتریت. نیتریت منفی: عدم رنگ‌گیری که نیاز به تست تأییدی با پودر روی (احیاءکننده شیمیایی) دارد.
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922: ایندول مثبت و نیتریت مثبت. سویه Acinetobacter baumannii ATCC 19606: ایندول منفی و نیتریت منفی (نیترات احیا نشده).
• کاربرد اصلی: شناسایی و تمایز باکتری‌های گرم منفی روده‌ای و غیرروده‌ای در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی، غذایی و محیطی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط Indole Nitrite Medium ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک و دور از نور مستقیم نگهداری نمایید. پس از آماده‌سازی و استریل شدن، لوله‌های محیط را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. توصیه می‌شود برای هر ارگانیسم حداقل دو لوله کشت داده شود: یکی برای تست ایندول در ۲۴ ساعت و دیگری برای تست نیترات که ممکن است نیاز به انکوباسیون ۴۸ ساعته داشته باشد. برای تست ایندول، حدود ۰.۲ تا ۰.۵ میلی‌لیتر معرف کواک یا اهرلیخ به لوله کشت اضافه شده و به آرامی تکان داده می‌شود. تشکیل حلقه قرمز در سطح نشانه مثبت است. برای تست نیترات، ابتدا معرف‌های سولفانیلیک اسید و سپس آلفا-نفتیل آمین اضافه می‌شوند. در صورت منفی بودن، مقدار کمی پودر روی اضافه کنید. ایجاد رنگ قرمز پس از اضافه کردن پودر روی نشان می‌دهد که نیترات هنوز در محیط موجود است (یعنی احیا نشده) و نتیجه نهایی منفی است. اگر پس از اضافه کردن پودر روی نیز رنگی ایجاد نشود، نشان‌دهنده احیای نیترات به فرآورده‌های گازی مانند نیتروژن یا آمونیاک است که آن هم یک نتیجه مثبت محسوب می‌شود. از معرف‌های تازه تهیه شده استفاده کنید و تاریخ انقضا را رعایت نمایید.