محیط کشت هارت اینفیوژن براث 2

محیط کشت براث عصاره قلب (Heart Infusion Broth)

محیط کشت Heart Infusion Broth فرم مایع محیط Heart Infusion Agar است. این محیط بر پایه عصاره قلب گاو فرموله شده که منبعی غنی از اسیدهای آمینه آزاد، پپتیدها، ویتامین‌های گروه B، کربوهیدرات‌ها و سایر فاکتورهای رشد ضروری است. این ترکیب غنی، آن را برای کشت باکتری‌های سخت‌گیر که در محیط‌های پایه ساده رشد نمی‌کنند، ایده‌آل می‌سازد. فاقد هرگونه مهارکننده انتخابی است و بنابراین یک محیط غنی‌کننده غیرانتخابی (Non-Selective Enrichment Broth) محسوب می‌شود. کاربرد اصلی آن در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی به عنوان محیط پایه برای کشت خون (Blood Culture) در بطری‌های مخصوص است، جایی که توانایی حمایت از رشد حتی تعداد کم باکتری‌ها یا قارچ‌های بیماری‌زا از نمونه خون بیمار حیاتی است. همچنین برای کشت مایعات استریل بدن مانند مایع مغزی-نخاعی (CSF)، مفصل و سایر نمونه‌های بالینی ارزشمند است.

این محیط در تحقیقات نیز برای تهیه اینوکولوم اولیه (Starter Culture) باکتری‌های سخت‌گیر قبل از انتقال به محیط‌های حداقل (Minimal Media) یا برای تولید زیست‌توده با کیفیت بالا استفاده می‌شود. شفافیت آن امکان مشاهده آسان کدورت ناشی از رشد را فراهم می‌کند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، غنی‌کننده عمومی غیرانتخابی برای باکتری‌ها و قارچ‌ها
• هدف کشت: کشت و غنی‌سازی غیرانتخابی میکروارگانیسم‌های سخت‌گیر و غیرسخت‌گیر از نمونه‌های بالینی استریل (خون، CSF) و غیربالینی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی عصاره قلب و پپتون) که پس از حل کردن در آب مقطر، در لوله‌ها یا بطری‌های کشت خون توزیع و اتوکلاو می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: عصاره قلب گاو، پپتون یا تریپتون، کلرید سدیم، دی‌پتاسیم فسفات (به عنوان بافر)
• ویژگی متمایزکننده: استفاده از عصاره قلب به عنوان منبع مغذی برتر برای حمایت از رشد میکروارگانیسم‌های سخت‌گیر و آسیب‌دیده.
• شرایط کشت: در بطری‌های کشت خون، نمونه خون بیمار (معمولاً ۵-۱۰ میلی‌لیتر) مستقیماً به بطری حاوی محیط اضافه می‌شود. برای کشت مایعات بدن، نمونه مستقیماً به لوله حاوی محیط تلقیح می‌گردد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد، معمولاً به مدت ۵ تا ۷ روز برای کشت خون (با بررسی روزانه) یا ۱۸ تا ۴۸ ساعت برای کشت مستقیم. اغلب در انکوباتور چرخان (برای اختلاط و هوادهی بهتر) یا سیستم‌های اتوماتیک کشت خون قرار می‌گیرد.
• خوانش نتیجه: رشد مثبت با مشاهده کدورت (Turbidity)، تشکیل پلت، تولید گاز (در بطری‌های مجهز به حسگر) یا تغییر رنگ نشانگر (در صورت وجود) مشخص می‌شود. کشت منفی شفاف باقی می‌ماند. هر نشانه‌ای از رشد مستلزم کشت زیر (Subculture) روی محیط‌های جامد برای شناسایی است.
• کنترل کیفیت: سویه Streptococcus pneumoniae ATCC 6305: رشد خوب با ایجاد کدورت. سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923: رشد خوب. سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: رشد خوب.
• کاربرد اصلی: محیط پایه استاندارد برای سیستم‌های کشت خون (Blood Culture) و کشت مایعات استریل بدن در میکروبیولوژی بالینی؛ محیط غنی‌کننده برای باکتری‌های سخت‌گیر در تحقیقات.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط Heart Infusion Broth ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. برای تهیه، پودر را در آب مقطر حل کرده و کاملاً هم بزنید تا محلول شفاف شود. در صورت استفاده برای کشت خون، محیط باید در بطری‌های مخصوص کشت خون که تحت خلاء یا حاوی اتمسفر غنی از CO₂ هستند، توزیع و سپس اتوکلاو شود. از حجم مناسب محیط در بطری‌ها مطابق دستور سازنده سیستم کشت خون استفاده شود. محیط‌های آماده را می‌توان در دمای اتاق یا در یخچال (۲-۸ درجه سانتی‌گراد) نگهداری کرد و قبل از استفاده باید به دمای اتاق رسانده شوند. هنگام تلقیح نمونه خون، از آلودگی جلوگیری کرده و نسبت حجم خون به محیط را رعایت کنید (معمولاً ۱:۵ تا ۱:۱۰). بطری‌های کشت خون باید روزانه از نظر علائم رشد (کدورت، همولیز، تولید گاز، تغییر رنگ) بررسی شوند. سیستم‌های اتوماتیک، رشد را با حسگرهای CO₂ تشخیص می‌دهند. هر بطری مثبت باید بلافاصله زیرکشت داده شود. برای اهداف تحقیقاتی یا تهیه کشت اولیه، می‌توان محیط را در لوله‌ها یا فلاسک‌های معمولی تهیه و تحت شرایط شیکر (برای هوازی‌ها) یا ایستا (برای بیهوازی‌ها) انکوبه کرد. از آنجایی که محیط غیرانتخابی است، در صورت آلودگی تصادفی، ارگانیسم‌های آلاینده به سرعت رشد خواهند کرد. بنابراین رعایت شرایط آسپتیک در تمام مراحل حیاتی است. این محیط را می‌توان با افزودن سدیم پلی‌آنتول سولفونات (SPS) به عنوان ضد انعقاد و مهارکننده فاگوسیتوز برای کشت خون بهینه‌تر نمود.