محیط کشت جیولییتی کانتونی براث بیس 3

محیط کشت براث جیولیتی کانتونی (Giolitti Cantoni Broth Base)

محیط کشت Giolitti Cantoni Broth Base یک محیط غنی‌کننده انتخابی است که بر پایه تریپتون، عصاره مخمر و لاکتوز فرموله شده است. انتخاب‌پذیری شدید این محیط ناشی از افزودن دو عامل مهارکننده اصلی است: سدیم آزاید که به طور خاص باکتری‌های گرم‌منفی را مهار می‌کند و تلوری پتاسیم که همزمان باکتری‌های گرم‌منفی و بسیاری از کوکسی‌های گرم‌مثبت (به جز استافیلوکوک‌های مقاوم) را مهار می‌نماید. Staphylococcus aureus و برخی دیگر از استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت به این ترکیبات مقاوم بوده و می‌توانند در حضور آنها تکثیر یابند. همچنین حضور لیتیم کلرید به مهار بیشتر فلور همراه کمک می‌کند. نشانگر قرمز فنول در محیط وجود دارد که در pH اسیدی (ناشی از تخمیر لاکتوز) زرد می‌شود. تولید اسید از تخمیر لاکتوز توسط استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت، یک شاخص بیوشیمیایی اولیه مفید است.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی غذایی و کنترل کیفیت مواد آرایشی-بهداشتی مطابق با استانداردهایی مانند ISO 6888 و FDA/BAM است. این محیط برای غنی‌سازی انتخابی Staphylococcus aureus از نمونه‌هایی مانند شیر، پنیر، گوشت، محصولات دریایی و کرم‌ها استفاده می‌شود تا حساسیت تشخیص را قبل از کشت بر روی محیط‌های جامد انتخابی (مانند Baird-Parker Agar) افزایش دهد. روش متداول، کشت مستقیم نمونه در محیط یا استفاده از روش Most Probable Number (MPN) است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی و غنی‌کننده برای استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی و تکثیر Staphylococcus aureus و استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت مرتبط از نمونه‌های غذایی و آرایشی-بهداشتی
• حالت فیزیکی: پودر (حل شده در آب مقطر، توزیع در لوله‌های حاوی لوله دورهام معکوس، اتوکلاو و سپس افزودن مکمل استریل)
• ترکیبات کلیدی پایه: تریپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، لیتیم کلرید، قرمز فنول، آگار (مقدار کم برای کاهش تلاطم)
• مکمل ضروری (Giolitti Cantoni Supplement): محلول استریل حاوی تلوری پتاسیم (K₂TeO₃) و سدیم آزاید (NaN₃)
• اصول آزمون: عوامل انتخابی (آزاید و تلوریت) فلور رقیب (گرم‌منفی‌ها و بیشتر گرم‌مثبت‌ها) را مهار می‌کنند. استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت مقاوم رشد کرده و در صورت تخمیر لاکتوز، اسید تولید می‌کنند که باعث زرد شدن محیط (به دلیل قرمز فنول) و گاهی تولید گاز (جمع شدن در لوله دورهام) می‌شود.
• شرایط کشت: نمونه یا رقت آن مستقیماً به لوله‌های حاوی محیط پایه + مکمل اضافه می‌شود. لوله دورهام معکوس برای تشخیص تولید گاز قرار داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: مثبت اولیه: زرد شدن محیط (تولید اسید) همراه با کدورت (رشد). تولید گاز نیز ممکن است مشاهده شود. این نتیجه نشان‌دهنده احتمال حضور استافیلوکوک‌های کوآگولاز مثبت است و باید با کشت بر روی محیط جامد انتخابی (مانند Baird-Parker) و تست کوآگولاز تأیید شود. منفی: عدم تغییر رنگ (قرمز/بنفش باقی می‌ماند) و عدم کدورت.
• کنترل کیفیت: سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923: رشد خوب، زرد شدن محیط. سویه Escherichia coli ATCC 25922: مهار رشد (عدم کدورت، عدم تغییر رنگ).
• کاربرد اصلی: روش استاندارد برای غنی‌سازی و شناسایی Staphylococcus aureus در مواد غذایی، آرایشی و بهداشتی مطابق با دستورالعمل‌های ISO و FDA.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Giolitti Cantoni Broth Base و مکمل خشک آن از ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک (زیر ۸ درجه سانتی‌گراد) و دور از نور نگهداری کنید. مکمل (محلول تلوریت پتاسیم و سدیم آزاید) حساس به حرارت است و نباید اتوکلاو شود. این مکمل باید به صورت استریل فیلتر شده و پس از اتوکلاو و خنک شدن محیط پایه (دمای حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد) به آن اضافه گردد. لوله‌های محیط حتماً باید حاوی لوله دورهام معکوس (برای تشخیص گاز) باشند. حجم توصیه شده محیط معمولاً ۱۰ میلی‌لیتر است. نمونه‌های جامد باید به صورت سوسپانسیون یا هموژنایز شده اضافه شوند. پس از انکوباسیون، تمام لوله‌های دارای رشد و تغییر رنگ به زرد (حتی خفیف) باید به عنوان مثبت در نظر گرفته شده و بر روی محیط جامد انتخابی (مانند Baird-Parker Agar) کشت سطحی شوند. از آنجایی که تلوریت سمی است، در حین کار با مکمل باید از دستکش استفاده شود و پسماندها مطابق مقررات دفع مواد شیمیایی خطرناک، مدیریت گردند. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای مدت محدود نگهداری کرد، اما استفاده تازه از آن ترجیح داده می‌شود. برای نمونه‌های با آلودگی احتمالی بالا، روش رقت متوالی (MPN) توصیه می‌شود. تفسیر نتایج باید همراه با تست‌های تأییدی (کوآگولاز، کاتالاز، کلنی‌شناسی) باشد، زیرا برخی استافیلوکوک‌های کوآگولاز منفی نیز ممکن است در این محیط رشد کنند.