محیط کشت گلوکز یست اکسترکت پپتون براث 3

محیط کشت براث پپتون عصاره مخمر گلوکز (GYEP Broth)

محیط کشت Glucose Yeast Extract Peptone (GYEP) Broth فرم مایع محیط جامد GYEP Agar است که فاقد آگار می‌باشد. این محیط یک براث غنی جهانی است که سه رکن اصلی تغذیه میکروبی را یکجا ارائه می‌دهد: گلوکز به عنوان منبع کربن و انرژی سریع و بهینه، عصاره مخمر به عنوان منبع غنی ویتامین‌های گروه B، نوکلئوتیدها و فاکتورهای رشد پیچیده، و پپتون به عنوان منبع نیتروژن، اسیدهای آمینه و پپتیدهای با زنجیره کوتاه. این ترکیب باعث می‌شود محیط GYEP Broth برای رشد سریع و با بازده بالا (High-cell-density) بسیاری از میکروارگانیسم‌ها، از جمله آنهایی که نیازهای تغذیه‌ای پیچیده دارند، ایده‌آل باشد. کشت مایع در این محیط امکان هم‌زنیش (Shaking) و هوادهی (Aeration) را فراهم می‌کند که برای رشد هوازی و تولید بسیاری از متابولیت‌های ثانویه ضروری است.

کاربرد اصلی آن در تحقیقات میکروبیولوژی، زیست‌فناوری و تخمیر صنعتی است. از این محیط برای تهیه پیش‌کشت (Pre-culture)، تخمیر در فلاسک یا بیورآکتور، تولید آنتی‌بیوتیک‌ها، آنزیم‌ها، پروتئین‌های نوترکیب و سایر محصولات میکروبی، مطالعات رشد (Growth Curve) و نیز برای تکثیر میکروارگانیسم‌ها قبل از انجام تست‌های مختلف استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، غنی‌کننده عمومی و همه‌کاره برای کشت مایع
• هدف کشت: کشت و تکثیر انبوه باکتری‌ها، مخمرها، کپک‌ها (در شرایط معلق) و اکتینومیست‌ها برای اهداف تحقیقاتی، صنعتی و تشخیصی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، عصاره مخمر، گلوکز و نمک‌های معدنی) که پس از حل کردن در آب مقطر و اتوکلاو، در فلاسک یا لوله توزیع می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، گلوکز (دکستروز)، منیزیم سولفات، پتاسیم فسفات دی‌بازیک (به عنوان بافر و منبع مواد معدنی)
• مزیت کلیدی: ارائه ترکیب کامل و متعادل در فرم مایع که امکان رشد سریع، همگن و با چگالی سلولی بالا را تحت شرایط هوادهی فراهم می‌کند.
• شرایط کشت: معمولاً به صورت کشت شیک (Shake Flask) در انکوباتور شیکردار یا در بیورآکتور انجام می‌شود. حجم محیط نسبت به حجم ظرف باید مناسب باشد تا هوادهی کافی وجود داشته باشد (معمولاً ۱۰-۲۰٪ حجم کل فلاسک).
• شرایط انکوباسیون: بسته به میکروارگانیسم هدف: دمای ۳۰-۳۷ درجه سانتی‌گراد برای باکتری‌ها و مخمرها با سرعت چرخش ۱۵۰-۲۵۰ RPM به مدت ۱۲-۴۸ ساعت؛ برای کپک‌ها و اکتینومیست‌ها ممکن است دمای ۲۵-۳۰ درجه سانتی‌گراد و دوره طولانی‌تر نیاز باشد.
• خوانش نتیجه: رشد به صورت کدورت (Turbidity) فزاینده در محیط مشاهده می‌شود. میزان رشد را می‌توان با اندازه‌گیری جذب نوری (OD) در طول موج ۶۰۰ نانومتر به طور کمی ارزیابی کرد. تشکیل پلت (Pellet) در کف برای برخی قارچ‌ها یا اکتینومیست‌ها نیز محتمل است.
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922: ایجاد کدورت سریع و قابل اندازه‌گیری پس از ۱۸-۲۴ ساعت انکوباسیون در شیکر. سویه Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763: ایجاد کدورت خوب پس از ۲۴-۴۸ ساعت.
• کاربرد اصلی: محیط پایه مایع برای تحقیقات فیزیولوژی میکروبی، مطالعات کشت، بهینه‌سازی تخمیر، تولید زیست‌توده (Biomass) و متابولیت‌های میکروبی در مقیاس آزمایشگاهی و نیمه‌صنعتی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط GYEP Broth ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. برای تهیه، پودر را در آب مقطر حل کرده و کاملاً هم بزنید تا محلول شفاف شود. از جوشاندن طولانی‌مدت به دلیل وجود گلوکز خودداری کنید. محیط را طبق دستورالعمل اتوکلاو نمایید. برای کشت‌های هوازی، استفاده از درب‌های تنفس‌دار (فیلتردار) یا بستن شل درب فلاسک با فویل آلومینیومی یا پنبه برای تبادل گاز ضروری است. حجم محیط در فلاسک نباید بیش از ۲۰٪ ظرفیت آن باشد تا هوادهی کافی برقرار شود. تلقیح اولیه (Inoculum) باید از یک کشت تازه و فعال تهیه شود (معمولاً ۱-۵٪ حجمی). pH محیط را می‌توان قبل از اتوکلاو مطابق نیاز ارگانیسم هدف تنظیم کرد (اغلب pH 7.0). در طول کشت، کدورت را می‌توان به طور دوره‌ای با اسپکتروفتومتر اندازه‌گیری کرد تا منحنی رشد رسم شود. برای جلوگیری از آلودگی در کشت‌های طولانی‌مدت، افزودن آنتی‌بیوتیک‌های مناسب (در صورت عدم تداخل با هدف تحقیق) قابل بررسی است. پس از اتمام رشد، سلول‌ها را می‌توان با سانتریفیوژ جدا کرده و ابرناتانت را برای آنالیز متابولیت‌ها نگهداری نمود. محیط مایع آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت کوتاه نگهداری کرد، اما تهیه تازه آن برای نتایج بهینه ترجیح داده می‌شود. برای کشت میکروارگانیسم‌های بیهوازی، باید از شرایط بیهوازی و عدم شیکر استفاده کرد.