محیط کشت فنول رد براث بیس

محیط کشت پایه براث فنل رد (Phenol Red Broth Base)

محیط کشت Phenol Red Broth Base یک محیط مایع پایه و همه‌کاره است که حاوی پپتون، نشانگر pH فنل رد و اغلب کلرید سدیم می‌باشد. این پایه به خودی خود فاقد کربوهیدرات است. با افزودن یک کربوهیدرات اختصاصی و استریل (معمولاً با غلظت ۰.۵-۱٪) مانند گلوکز، لاکتوز، مانیتول، ساکارز، مالتوز یا دکسترین، محیطی برای تست تخمیر آن قند فراهم می‌شود. نشانگر فنل رد در pH حدود ۶.۸ زرد رنگ است و در صورت تخمیر قند توسط باکتری و تولید اسید، pH کاهش یافته و محیط به رنگ زرد پایدار درمی‌آید. اگر باکتری قادر به تخمیر آن قند نباشد، از پپتون محیط استفاده کرده و ممکن است با تولید آمونیاک، محیط را قلیایی کند که باعث تغییر رنگ به قرمز-صورتی پررنگ می‌شود. اغلب یک لوله کوچک معکوس (لوله دورهام) نیز در داخل لوله محیط قرار داده می‌شود تا تولید گاز (عمدتاً CO₂ و H₂) از تخمیر را که در لوله جمع می‌شود، نشان دهد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی، تشخیصی، آموزشی و تحقیقاتی برای شناسایی و تمایز باکتری‌ها بر اساس الگوی تخمیر کربوهیدرات‌های مختلف است. این تست بخشی اساسی از مجموعه تست‌های بیوشیمیایی برای شناسایی انتروباکتریاسه‌ها، استافیلوکوک‌ها، استرپتوکوک‌ها و بسیاری دیگر از باکتری‌ها محسوب می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، پایه برای تهیه محیط‌های تشخیصی تخمیر قند
• هدف کشت: بررسی توانایی باکتری در تخمیر یک کربوهیدرات خاص و تولید گاز
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، فنل رد و کلرید سدیم) که پس از حل کردن در آب مقطر، توزیع در لوله‌های حاوی لوله دورهام، افزودن کربوهیدرات و سپس اتوکلاو شدن.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، فنل رد، کلرید سدیم (NaCl)
• افزودنی ضروری: کربوهیدرات انتخابی استریل (گلوکز، لاکتوز، مانیتول، ساکارز، مالتوز، زایلوز، اینوزیتول، رافینوز و غیره).
• اصول آزمون: تخمیر مثبت (تولید اسید): تغییر رنگ محیط از قرمز-نارنجی به زرد. تخمیر مثبت با تولید گاز: تغییر رنگ به زرد + تشکیل حباب یا جمع شدن گاز در لوله دورهام. تخمیر منفی: عدم تغییر رنگ (قرمز-نارنجی باقی می‌ماند) یا تغییر به قرمز-صورتی پررنگ (قلیایی شدن).
• شرایط کشت: لوله محیط با یک کلنی یا سوسپانسیون خالص باکتری تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۴۸ ساعت (گاهی تا ۷ روز برای باکتری‌های کند).
• خوانش نتیجه: رنگ محیط و وضعیت لوله دورهام بررسی می‌شود. A (اسید): زرد شدن. AG (اسید و گاز): زرد شدن + گاز در لوله دورهام. (-) منفی: بدون تغییر یا قلیایی (قرمز/صورتی).
• کنترل کیفیت: برای محیط فنل رد گلوکز: سویه Escherichia coli ATCC 25922: مثبت برای اسید و گاز (AG). سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: منفی (عدم تخمیر) یا قلیایی. برای محیط فنل رد مانیتول: سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923: مثبت (زرد). سویه Staphylococcus epidermidis ATCC 12228: منفی.
• کاربرد اصلی: تست استاندارد بیوشیمیایی برای تعیین الگوی تخمیر کربوهیدرات‌ها در شناسایی باکتری‌ها.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Phenol Red Broth Base ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. برای تهیه محیط اختصاصی، ابتدا پایه را در آب مقطر حل کنید. سپس کربوهیدرات انتخابی (از محلول استریل فیلترشده ۱۰-۲۰٪) را به غلظت نهایی معمولاً ۰.۵-۱٪ اضافه نمایید. مخلوط را در لوله‌های تست حاوی یک لوله دورهام معکوس کوچک توزیع کنید. محیط را طبق دستور اتوکلاو نمایید (از اتوکلاو طولانی‌مدت یا دمای خیلی بالا خودداری شود تا از کاراملیزه شدن قند جلوگیری گردد). محیط‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری کرد. قبل از استفاده، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. لوله دورهام باید کاملاً پر از محیط و فاقد حباب هوا باشد. تلقیح باید به گونه‌ای انجام شود که باعث ورود حباب هوا به لوله دورهام نشود. خوانش اولیه در ۱۸-۲۴ ساعت انجام شود، اما برای باکتری‌های کند یا برای تشخیص تولید گاز دیرهنگام، ممکن است نیاز به انکوباسیون تا ۴۸ ساعت یا بیشتر باشد. برخی باکتری‌ها ممکن است ابتدا اسید تولید کنند (زردی) و سپس با مصرف اسیدها یا تخریب پپتون، محیط را مجدداً قلیایی کنند (بازگشت به رنگ قرمز). این پدیده باید در گزارش قید شود. برای هر کربوهیدرات، یک لوله کنترل تلقیح نشده نیز همراه داشته باشید.