محیط کشت PA براث

محیط کشت براث حضور-غیاب (PA Broth)

محیط کشت Presence Absence (PA) Broth یک محیط غنی‌کننده انتخابی است که برای آزمون حضور-غیاب (Presence-Absence Test) در آنالیز میکروبیولوژیکی آب به کار می‌رود. هدف این آزمون، تعیین این است که آیا در یک حجم مشخص از آب (معمولاً ۱۰۰ میلی‌لیتر)، حتی یک سلول زنده از باکتری‌های شاخص گروه کلی‌فرم (مانند E. coli) وجود دارد یا خیر. این محیط حاوی لاکتوز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات قابل تخمیر است. کلی‌فرم‌ها قادر به تخمیر لاکتوز با تولید اسید و گاز هستند. همچنین، محیط حاوی عصاره مخمر و تریپتون به عنوان مواد مغذی، و سولفات سدیم لوریل (Lauryl Sulfate) به عنوان یک عامل انتخابی برای مهار باکتری‌های گرم‌مثبت و برخی گرم‌منفی‌های غیرکلی‌فرم است. نشانگر بروموکروزول بنفش (Bromocresol Purple) نیز در محیط وجود دارد که در pH اسیدی (ناشی از تخمیر لاکتوز) به رنگ زرد درمی‌آید. تشکیل گاز در لوله دورهام کوچک موجود در لوله، همراه با تغییر رنگ به زرد، نشانه مثبت اولیه برای حضور احتمالی کلی‌فرم‌ها است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت آب (آشامیدنی، تفریحی، بطری) برای انجام آزمون کیفی حضور-غیاب کلی‌فرم‌ها و E. coli است. این آزمون یک روش غربالگری حساس است که برای نمونه‌های با کیفیت مورد انتظار بالا (مانند آب آشامیدنی) استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی-غنی‌کننده برای آزمون حضور-غیاب کلی‌فرم‌ها
• هدف کشت: تشخیص کیفی حضور یا عدم حضور باکتری‌های کلی‌فرم و E. coli در حجم‌های بزرگ نمونه آب (معمولاً ۱۰۰ میلی‌لیتر)
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی تریپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، سولفات سدیم لوریل و بروموکروزول بنفش) که پس از حل کردن در آب مقطر، در بطری‌های بزرگ (حاوی لوله دورهام معکوس) توزیع و اتوکلاو می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: تریپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، سولفات سدیم لوریل (Lauryl Sulfate)، بروموکروزول بنفش
• اصول آزمون: کلی‌فرم‌ها لاکتوز را تخمیر کرده، اسید (تغییر رنگ به زرد) و گاز (جمع‌شده در لوله دورهام) تولید می‌کنند. سولفات لوریل باکتری‌های غیرهدف را مهار می‌کند.
• شرایط کشت: حجم معینی از نمونه آب (۱۰۰ میلی‌لیتر) مستقیماً به بطری حاوی محیط غلیظ دو برابر (Double Strength) اضافه می‌شود. برای حجم‌های کمتر (۵۰ میلی‌لیتر) از محیط با غلظت معمولی (Single Strength) استفاده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ ± ۰.۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. مشاهده اولیه در ۲۴ ساعت و در صورت منفی بودن، تا ۴۸ ساعت ادامه می‌یابد.
• خوانش نتیجه: مثبت اولیه (Presumptive Positive): تشکیل هر مقدار گاز در لوله دورهام و/یا تغییر رنگ محیط به زرد در ۲۴ یا ۴۸ ساعت. منفی: عدم تغییر رنگ (بنفش/خاکستری) و عدم تولید گاز پس از ۴۸ ساعت.
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922: مثبت (گاز + تغییر رنگ به زرد) در ۲۴ ساعت. سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: منفی (عدم تولید گاز و عدم تغییر رنگ یا قلیایی شدن).
• کاربرد اصلی: آزمون استاندارد برای بررسی کیفیت میکروبیولوژیکی آب آشامیدنی و سایر آب‌های با کیفیت بالا، به ویژه برای تشخیص آلودگی مدفوعی بر اساس استانداردهای EPA و استاندارد متد.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط PA Broth ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. برای تهیه محیط غلیظ دو برابر (Double Strength) برای تست ۱۰۰ میلی‌لیتر نمونه، پودر را در نصف حجم نهایی آب مقطر حل کنید. محیط را در بطری‌هایی که حاوی یک لوله دورهام کوچک معکوس هستند، توزیع و سپس اتوکلاو نمایید. پس از اتوکلاو، بطری‌ها را در یخچال نگهداری کرده و قبل از استفاده به دمای اتاق برسانید. نمونه آب باید عاری از کلر باقی‌مانده باشد. در صورت وجود کلر، باید به نمونه تیوسولفات سدیم اضافه شود. پس از افزودن نمونه به بطری، آن را به آرامی مخلوط کنید تا محلول یکنواختی حاصل شود، اما مراقب باشید حباب هوا وارد لوله دورهام نشود. بطری‌ها را در انکوباتور ۳۵ درجه سانتی‌گراد قرار دهید. بررسی اولیه در ۲۴ ساعت و در صورت منفی بودن، بررسی نهایی در ۴۸ ساعت انجام می‌شود. هر بطری که مثبت اولیه باشد، باید با روش‌های تأییدی (مانند کشت در محیط BGB Broth برای کلی‌فرم‌ها و سپس در محیط EC Broth یا روی ممبران فیلتر برای E. coli) پیگیری شود. این آزمون یک آزمون کیفی است و تعداد باکتری را مشخص نمی‌کند. تمام ظروف و نمونه‌های مثبت باید مطابق دستورالعمل‌های بی‌خطرسازی دفع شوند.