محیط کشت سودوموناس CN آگار بیس 1

محیط کشت آگار انتخابی سودوموناس سی‌ان (Pseudomonas CN Agar)

محیط کشت Pseudomonas CN Selective Agar Base یک محیط کشت انتخابی-افتراقی تخصصی است که بر پایه ترکیب پپتون، گلیسرول و آگار فرموله شده و با افزودن مکمل اختصاصی آنتی‌بیوتیکی سفالوریدین (Cephaloridine)، فوسفومایسین (Fosfomycin)، و سرتیماید (Cetrimide) (CFC) به یک محیط انتخابی قوی تبدیل می‌شود. این ترکیب آنتی‌بیوتیکی رشد اغلب فلور باکتریایی روده‌ای، گرم مثبت‌ها و سایر گرم منفی‌های رقیب را مهار می‌کند، در حالی که به سودوموناس آئروژینوزا و برخی گونه‌های نزدیک به آن اجازه رشد می‌دهد. حضور سرتیماید (یک ماده ضدعفونی کننده کاتیونی) خاصیت انتخابی بودن محیط را تقویت کرده و همچنین تولید رنگدانه‌های پیوسیانین (آبی-سبز) و پیووریدین (زرد-سبز فلورسنت) را که مشخصه بسیاری از سودوموناس‌ها به ویژه سودوموناس آئروژینوزا است، تحریک یا تشدید می‌کند. گلیسرول نیز به عنوان یک منبع کربن اضافی عمل می‌کند.

این محیط به طور گسترده در میکروبیولوژی بالینی (برای نمونه‌های زخم، ادرار، تنفسی)، کنترل کیفیت میکروبیولوژی داروها و محصولات آرایشی-بهداشتی، و آزمایش‌های آب و محیط استفاده می‌شود. کلونی‌های سودوموناس آئروژینوزا معمولاً به رنگ سبز-آبی، مسطح، با حاشیه نامنظم و اغلب با بوی خاص و تولید رنگدانه‌های قابل انتشار در محیط اطراف کلونی دیده می‌شوند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی (Selective) و افتراقی (Differential) برای سودوموناس‌ها
• هدف کشت: جداسازی و شمارش انتخابی سودوموناس آئروژینوزا و سایر سودوموناس‌ها از نمونه‌های پیچیده
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو). مکمل آنتی‌بیوتیکی CFC پس از سرد شدن محیط و قبل از ریختن پلیت اضافه می‌شود.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، گلیسرول، دی‌پتاسیم فسفات، سولفات منیزیم، آگار
• مکمل انتخابی (CFC): سفالوریدین (مهارکننده طیف وسیعی از گرم منفی‌ها و گرم مثبت‌ها)، فوسفومایسین (مهارکننده انتخابی باکتری‌های گرم منفی روده‌ای)، و سرتیماید (مهارکننده باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از گرم منفی‌ها و محرک تولید رنگدانه پیوسیانین).
• مکانیسم افتراق: تشدید تولید رنگدانه‌های فلورسنت پیوسیانین (آبی-سبز) و پیوریدین (زرد-سبز) توسط سرتیماید و گلیسرول.
• شرایط کشت: کشت سطحی یا Spread Plate از نمونه.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. مشاهده تحت نور UV (۳۶۵ نانومتر) برای تشخیص فلورسانس رنگدانه پیوریدین مفید است.
• خوانش نتیجه: سودوموناس آئروژینوزا: کلونی‌های بزرگ، مسطح، با رنگ سبز-آبی (پیوسیانین) و/یا فلورسانس سبز-زرد تحت نور UV، اغلب با رنگدانه منتشرشده در آگار. سایر سودوموناس‌ها: ممکن است کلونی‌های کوچک‌تر، رنگ‌های دیگر (زرد، قهوه‌ای) یا فقط فلورسانس نشان دهند. رشد سایر باکتری‌ها: معمولاً به دلیل وجود مکمل CFC مهار می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تولید رنگدانه/فلورسانس با سویه Pseudomonas aeruginosa (کنترل مثبت). عدم رشد یا رشد ضعیف با سویه Escherichia coli (کنترل منفی).
• کاربرد اصلی: تشخیص بالینی عفونت‌های سودوموناس، کنترل کیفیت میکروبی محصولات غیراستریل (آرایشی-بهداشتی، دارویی)، و بررسی آلودگی آب و محیط.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Pseudomonas CN Selective Agar Base محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. برای تهیه محیط، ابتدا پایه را مطابق دستورالعمل در آب مقطر حل کرده و اتوکلاو نمایید. اجازه دهید محیط تا دمای حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد سرد شود. سپس مکمل استریل آنتی‌بیوتیکی CFC (که به صورت جداگانه تهیه یا خریداری می‌شود) را به محیط اضافه کرده و به خوبی مخلوط کنید. بلافاصله محیط را در پلیت‌های استریل ریخته و بگذارید سفت شود. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور به مدت محدود (معمولاً یک هفته) نگهداری کرد. قبل از کشت، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. از آنجایی که برخی سویه‌های سودوموناس ممکن است به ترکیبات مکمل حساس باشند، در صورت مشکوک بودن به حضور گونه‌های غیرمعمول، کشت موازی روی یک محیط غیرانتخابی مانند آگار خون یا Nutrient Agar نیز توصیه می‌شود. برای تشخیص قطعی سودوموناس آئروژینوزا، انجام تست‌های بیوشیمیایی تکمیلی (مانند اکسیداز، تست رشد در ۴۲ درجه سانتی‌گراد) ضروری است. محیط تحت نور UV برای مشاهده فلورسانس بررسی شود. از تماس طولانی‌مدت پوست با محیط حاوی سرتیماید خودداری شود.