محیط کشت PSB براث بیس 2

محیط کشت براث پایه پی‌اس‌بی (PSB Broth Base)

محیط کشت PSB Broth Base یک محیط غنی‌سازی انتخابی برای ویبریو کلرا و سایر ویبریوهای بیماری‌زا (مانند V. parahaemolyticus) است. فرمولاسیون آن بر اساس ویژگی‌های بیوشیمیایی و مقاومت این باکتری‌ها به برخی عوامل انتخابی استوار است. این محیط حاوی صفرا (Bile) (معمولاً نمک‌های صفراوی مانند اگزگال صفرا) است که رشد بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت و برخی گرم منفی‌های روده‌ای را مهار می‌کند، در حالی که ویبریوها به دلیل زیستگاه طبیعی صفرادار روده، قادر به تحمل آن هستند. سوربیتول به عنوان منبع کربوهیدرات قابل تخمیر برای ویبریوها عمل می‌کند، در حالی که بسیاری از انتروباکتریاسه‌ها قادر به استفاده کارآمد از آن نیستند. این یک مزیت انتخابی اضافی ایجاد می‌کند. پپتون و عصاره مخمر نیز مواد مغذی ضروری را فراهم می‌آورند. محیط معمولاً دارای pH قلیایی (حدود ۸٫۶ تا ۹٫۰) است که برای رشد ویبریوها بهینه بوده و به عنوان یک عامل انتخابی دیگر، رشد بسیاری از رقیبان باکتریایی را محدود می‌کند. پس از دوره غنی‌سازی در PSB Broth، کشت بر روی محیط‌های جامد انتخابی مانند تیوسیترات بایل سوکروز آگار (TCBS) انجام می‌شود.

این محیط به طور گسترده در برنامه‌های نظارت بهداشتی و اپیدمیولوژیک برای تشخیص ویبریو کلرا از نمونه‌های محیطی (آب) و بالینی (مدفوع)، به ویژه در مناطق اندمیک یا طی شیوع بیماری، استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، غنی‌سازی انتخابی (Selective Enrichment Broth) برای ویبریوها.
• هدف کشت: غنی‌سازی و افزایش حساسیت تشخیص ویبریو کلرا (Vibrio cholerae) و سایر ویبریوهای بیماری‌زا از نمونه‌های آب و مدفوع.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو می‌شود).
• ترکیبات کلیدی انتخابی: نمک‌های صفراوی (Bile Salts) (مهارکننده انتخابی)، pH قلیایی بالا (۸٫۶-۹٫۰) (مهارکننده بسیاری از باکتری‌ها).
• ترکیبات کلیدی افتراقی/تغذیه‌ای: سوربیتول (منبع کربوهیدرات ترجیحی برای ویبریوها)، پپتون، عصاره مخمر.
• مکانیسم عمل: مهار رشد فلور روده معمولی توسط صفرا و pH قلیایی بالا، در حالی که ویبریوهای مقاوم و سازگار قادر به استفاده از سوربیتول و تکثیر هستند.
• شرایط کشت: اضافه کردن نمونه (مثلاً ۱ میلی‌لیتر آب یا ۱ گرم مدفوع در ۱۰ میلی‌لیتر محیط) و مخلوط کردن.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶ تا ۸ ساعت (برای غنی‌سازی اولیه سریع) یا ۱۸ تا ۲۴ ساعت (غنی‌سازی استاندارد).
• خوانش نتیجه: مثبت (احتمال حضور ویبریو): ایجاد کدورت در محیط (نشانه رشد). سپس باید بلافاصله بر روی محیط جامد انتخابی (مانند TCBS Agar) کشت داده شود. منفی: عدم کدورت.
• کنترل کیفیت: رشد خوب با سویه Vibrio cholerae O1 ATCC 14035 یا یک سویه محلی شناخته شده (کنترل مثبت). مهار رشد یا رشد ضعیف با سویه Escherichia coli ATCC 25922 (کنترل منفی).
• کاربرد اصلی: غنی‌سازی انتخابی اولیه برای جداسازی ویبریو کلرا در تشخیص آزمایشگاهی و نظارت محیطی، به ویژه در پروتکل‌های استاندارد بررسی آب از نظر ویبریو کلرا.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر PSB Broth Base محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. برای تهیه محیط، پودر را در آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم هم بزنید تا کاملاً حل شود. pH محیط باید پس از حل کردن، در محدوده ۸٫۶ ± ۰٫۲ تنظیم شود (معمولاً با هیدروکسید سدیم). سپس محیط را اتوکلاو کنید. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد. زمان غنی‌سازی مهم است؛ دوره کوتاه (۶-۸ ساعت) برای تشخیص سریع در شرایط شیوع بیماری می‌تواند استفاده شود، در حالی که دوره ۱۸-۲۴ ساعته حساسیت بیشتری دارد. نمونه آب باید با احتیاط و به مقدار مناسب (معمولاً به نسبت ۱:۱۰) به محیط اضافه شود. پس از انکوباسیون، از محیط کدر شده، کشت بر روی محیط TCBS Agar (یا سایر محیط‌های انتخابی ویبریو) انجام می‌شود. برای نمونه‌های مدفوع، ممکن است نمونه ابتدا در یک محیط غنی‌سازی قلیایی (مانند آب پپتون قلیایی – APW) کشت داده شود و سپس به PSB منتقل گردد یا به طور مستقیم استفاده شود. کنترل کیفی منظم با سویه‌های مرجع برای اطمینان از عملکرد صحیح محیط ضروری است. از آنجایی که ویبریو کلرا یک پاتوژن خطرناک است، تمام کارها باید در شرایط ایمنی زیستی مناسب (سطح ۲ یا بالاتر بسته به سویه) انجام شود.