محیط کشت سودوموناس آگار F 2

محیط کشت آگار اف سودوموناس برای فلورسین (Pseudomonas Agar F)

محیط کشت Pseudomonas Agar F که معروف به King B Medium است، یک محیط اختصاصی و مکمل محیط King A می‌باشد که برای تشدید تولید رنگدانه فلورسنت پیوریدین (فلورسین) و در درجه دوم پیوسیانین توسط باکتری‌های جنس سودوموناس فرموله شده است. فرمولاسیون این محیط مشابه King A است اما با تفاوت‌های کلیدی: حاوی گلیسرول و پپتون به عنوان منابع کربن و نیتروژن است، اما فاقد سیترات پتاسیم می‌باشد. این تفاوت در ترکیب، متابولیسم باکتری را به گونه‌ای هدایت می‌کند که تولید رنگدانه زرد-سبز فلورسنت پیوریدین را نسبت به رنگدانه آبی-سبز پیوسیانین ترجیح می‌دهد. حضور سولفات منیزیم به عنوان کوفاکتور آنزیمی ضروری است. این محیط نیز یک محیط غیرانتخابی است و هدف اصلی آن ایجاد شرایط بهینه برای مشاهده و مطالعه فلورسانس باکتریایی است که یک ویژگی مهم تشخیصی و تاکسونومیک برای بسیاری از سودوموناس‌ها (مانند P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida) محسوب می‌شود.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی تشخیصی و محیطی است. در آزمایشگاه بالینی، برای تایید شناسایی سودوموناس‌های فلورسنت به کار می‌رود. در میکروبیولوژی آب، خاک و مواد غذایی، برای جداسازی و شناسایی باکتری‌های فلورسنت از جمله سودوموناس‌های فلورسنت که ممکن اندیکاتور آلودگی باشند، مورد استفاده قرار می‌گیرد. مشاهده فلورسانس درخشان سبز-زرد تحت نور ماوراء بنفش (UV با طول موج ۳۶۵ نانومتر) ویژگی کلیدی تشخیصی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، غنی و اختصاصی برای تولید رنگدانه فلورسنت، غیرانتخابی.
• هدف کشت: تشدید و مشاهده تولید رنگدانه فلورسنت پیوریدین (فلورسین) توسط سودوموناس‌های فلورسنت (مانند P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida) برای اهداف تشخیصی و تحقیقاتی.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو).
• ترکیبات کلیدی محرک تولید فلورسین: گلیسرول (منبع کربن اصلی)، پپتون (منبع نیتروژن و پیش‌ساز)، سولفات منیزیم (کوآنزیم ضروری)، آگار. عدم وجود سیترات پتاسیم (برخلاف King A) کلید تمایز است.
• مکانیسم عمل: فراهم آوری پیش‌سازها و کوفاکتورهای مسیر بیوسنتزی پیوریدین (فلورسین) که یک سیدروفور پیوکرولینی است.
• شرایط کشت: کشت خطی یا نقطتی از کلونی‌های خالص شده.
• شرایط انکوباسیون: ۲۵ تا ۳۰ درجه سانتی‌گراد (دمای بهینه برای بسیاری از سودوموناس‌های فلورسنت محیطی) یا ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد (برای P. aeruginosa) به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. مشاهده تحت نور UV (۳۶۵ نانومتر) در تاریکی ضروری است.
• خوانش نتیجه: مثبت برای فلورسین: مشاهده فلورسانس درخشان سبز-زرد (یا سبز-آبی) واضح در اطراف کلونی و گاهی در کل محیط تحت نور UV. مثبت برای پیوسیانین: ممکن است تولید رنگدانه آبی-سبز نیز به طور همزمان اما معمولاً با شدت کمتر از King A رخ دهد. منفی: عدم مشاهده فلورسانس تحت نور UV.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تولید فلورسانس قوی با سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 یا Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 (کنترل مثبت). کشت موازی با یک سویه غیرفلورسنت به عنوان کنترل منفی.
• کاربرد اصلی: کمک به شناسایی سودوموناس‌های فلورسنت در آزمایشگاه تشخیصی و تحقیقاتی، مطالعات اکولوژیکی و غربالگری باکتری‌های فلورسنت در نمونه‌های محیطی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Pseudomonas Agar F (King B Medium) محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک، خنک و دور از نور نگهداری شود. برای تهیه محیط، مطابق دستورالعمل در آب مقطر حل کرده و با حرارت هم زده تا کاملاً شفاف شود. پس از اتوکلاو، اجازه دهید محیط خنک شده و سپس در پلیت ریخته شود. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در تاریکی برای مدت کوتاه نگهداری کرد. قبل از کشت، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. از آنجایی که این محیط غیرانتخابی است، برای جلوگیری از آلودگی، حتماً از کشت خالص استفاده شود. مشاهده نتایج تحت نور UV در یک اتاق تاریک یا با استفاده از محفظه مشاهده UV الزامی است. فلورسانس ممکن است پس از قرار گرفتن در معرض نور معمولی محو شود، بنابراین مشاهده بلافاصله پس از خارج کردن پلیت از انکوباتور توصیه می‌شود. برخی سویه‌ها ممکن است فلورسانس خود را تنها در دمای پایین‌تر (۲۵-۳۰ درجه سانتی‌گراد) نشان دهند. برای شناسایی کامل، استفاده همزمان از هر دو محیط King A (برای پیوسیانین) و King B (برای فلورسین) توصیه می‌شود. کلونی‌های فلورسنت غیرسودوموناسی (مانند برخی Burkholderia یا Xanthomonas) نیز ممکن است رشد کنند، بنابراین انجام تست‌های تکمیلی مانند اکسیداز ضروری است.