محیط کشت SIM مدیوم 2

محیط کشت اس‌آی‌ام (Sulfide Indole Motility Medium)

محیط کشت SIM Medium یک محیط چندکاره نیمه‌جامد است که با درصد پایین آگار (معمولاً ۰٫۳٪) فرموله شده است. این مقدار آگار به باکتری‌های متحرک اجازه می‌دهد در محیط پخش شوند، در حالی که باکتری‌های غیرمتحرک تنها در خط کشت رشد می‌کنند. محیط حاوی پپتون به عنوان منبع اسیدهای آمینه (از جمله تریپتوفان) و تیوسولفات سدیم به عنوان منبع گوگرد است. برای تشخیص تولید سولفید هیدروژن، یک ماده شاخص حاوی آهن (مانند فسفات آهن یا سولفات آهن) به محیط اضافه می‌شود. اگر باکتری قادر به احیای سولفات یا تیوسولفات به سولفید هیدروژن (H2S) باشد، این گاز با یون آهن واکنش داده و یک رسوب نامحلول و سیاهرنگ سولفید آهن (FeS) تشکیل می‌دهد. برای تست ایندول، پس از دوره انکوباسیون، معرف کواک (Kovac’s) یا ارلیش (Ehrlich’s) به سطح محیط اضافه می‌شود. باکتری‌هایی که دارای آنزیم تریپتوفاناز هستند، تریپتوفان را به ایندول تبدیل می‌کنند که با معرف واکنش داده و حلقه‌ای قرمز رنگ در بالای محیط ایجاد می‌کند. این محیط یک ابزار تشخیصی سریع و ارزشمند در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی است.

کاربرد اصلی آن در میکروبیولوژی تشخیصی بالینی و تحقیقاتی برای شناسایی اولیه و افتراقی باکتری‌های گرم منفی روده‌ای (مانند E. coli، Proteus، Salmonella، Shigella) و همچنین برخی باکتری‌های گرم مثبت (مانند Listeria) بر اساس الگوی سه گانه نتایج است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: نیمه‌جامد (Semi-solid) با آگار کم (۰٫۳-۰٫۴٪)، چندکاره برای تست‌های بیوشیمیایی.
• هدف کشت: انجام همزمان سه تست: تشخیص تولید سولفید هیدروژن (H2S)، تشخیص تولید ایندول (از تریپتوفان)، و تعیین تحرک (Motility) باکتری.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود، سپس در لوله‌های کشت ریخته و اتوکلاو می‌شود).
• ترکیبات کلیدی برای تست‌ها: پپتون (حاوی تریپتوفان)، تیوسولفات سدیم (منبع گوگرد)، نمک آهن (شاخص H2S، معمولاً سولفات آهن آمونیوم)، آگار کم (برای تست تحرک).
• مکانیسم تست تحرک: باکتری متحرک در محیط نیمه‌جامد به صورت منتشر (کدورت گسترده یا رشد در کل لوله) رشد می‌کند، در حالی که باکتری غیرمتحرک تنها در امتداد خط کشت سوزن رشد می‌کند (خط مشخص).
• مکانیسم تست H2S: احیای گوگرد (از تیوسولفات یا سیستئین) به H2S و تشکیل رسوب سیاهرنگ سولفید آهن.
• مکانیسم تست ایندول: هیدرولیز تریپتوفان به ایندول توسط آنزیم تریپتوفاناز و واکنش رنگ‌دهی با معرف کواک.
• شرایط کشت: کشت عمقی با سوزن استریل (Stab Inoculation) از یک کلونی خالص به مرکز لوله تا حدود دو سوم عمق.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت (گاهی تا ۴۸ ساعت برای مشاهده تحرک برخی گونه‌ها یا تولید H2S کند).
• خوانش نتیجه: تحرک: رشد منتشر در محیط = مثبت. رشد تنها در خط کشت = منفی. H2S: سیاه شدن محیط در هر نقطه (اغلب در امتداد خط کشت) = مثبت. ایندول: پس از افزودن ۵-۱۰ قطره معرف کواک به سطح محیط، تشکیل حلقه قرمز = مثبت. رنگ زرد معرف = منفی.
• کنترل کیفیت: Escherichia coli ATCC 25922: تحرک مثبت، H2S منفی، ایندول مثبت. Salmonella Typhimurium ATCC 14028: تحرک مثبت، H2S مثبت، ایندول منفی. Shigella flexneri ATCC 12022: تحرک منفی، H2S منفی، ایندول متغیر.
• کاربرد اصلی: شناسایی اولیه و افتراقی باکتری‌های روده‌ای در آزمایشگاه تشخیصی، به ویژه در مجموعه تست‌های استاندارد مانند IMViC (که I آن از SIM گرفته می‌شود) و به عنوان بخشی از روند شناسایی انتروباکتریاسه.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر SIM Medium محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. برای تهیه، پودر را در آب مقطر حل کرده، با حرارت به جوش آورید تا کاملاً شفاف شود. سپس در لوله‌های کشت (ترجیحاً لوله‌های باریک برای مشاهده بهتر تحرک) به ارتفاع حدود ۲-۳ اینچ ریخته و اتوکلاو کنید. لوله‌ها را به صورت عمودی سرد کنید. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت طولانی نگهداری کرد. کشت باید به روش استاب (Stab) و با سوزن مستقیم و سریع انجام شود، بدون تکان دادن سوزن در محیط. پس از انکوباسیون ابتدا تحرک و تولید H2S را بخوانید، سپس برای تست ایندول، معرف کواک را اضافه کنید. برای خوانش تحرک، بهتر است لوله را در مقابل نور نگه داشته و با یک لوله کنترل غیرمتحرک مقایسه کنید. برخی باکتری‌ها ممکن است H2S را به کندی تولید کنند، بنابراین در صورت منفی بودن اولیه، می‌توان تا ۴۸ ساعت انکوبه کرد. معرف کواک حاوی اسید هیدروکلریک و p-دیمتیل آمینوبنزآلدئید است و باید با احتیاط و در هود استفاده شود. محیط SIM همچنین می‌تواند برای تشخیص تولید سورنین (از سیستئین) توسط برخی باکتری‌ها نیز مورد استفاده قرار گیرد. برای باکتری‌های گرم مثبت متحرک (مانند Listeria)، ممکن است انکوباسیون در دمای اتاق (۲۵ درجه سانتی‌گراد) تحرک بهتری نشان دهد.