محیط کشت یرسینیا CIN آگار

محیط کشت آگار سین یرسینیا (Yersinia CIN Agar)

محیط کشت Yersinia CIN Agar یک محیط انتخابی قوی است که از ترکیب سه آنتی‌بیوتیک به عنوان عوامل انتخابی اصلی استفاده می‌کند: سف‌سولودین (Cefsulodin) (یک سفالوسپورین)، ایروگاسان (Irgasan) (یک ترکیب ضد باکتریایی با طیف وسیع) و نووبیوسین (Novobiocin). این ترکیب آنتی‌بیوتیکی به طور موثری رشد بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی روده‌ای (مانند E. coli، Proteus، Klebsiella، انتروکوک‌ها) را مهار می‌کند، در حالی که به یرسینیا انتروکولیتیکا اجازه رشد می‌دهد. این محیط همچنین دارای ویژگی‌های افتراقی است. حاوی مانیتول به عنوان منبع کربوهیدرات و قرمز خنثی (Neutral Red) به عنوان شاخص pH است. یرسینیا انتروکولیتیکا معمولاً مانیتول را تخمیر نمی‌کند، بنابراین کلونی‌ها قرمز تا قرمز-صورتی باقی می‌مانند (رنگ محیط اسیدی نشده). در مقابل، برخی باکتری‌های غیرهدف که مانیتول را تخمیر می‌کنند، محیط را زرد می‌کنند. حضور کریستال ویوله و نمک‌های صفراوی نیز به مهار بیشتر باکتری‌های گرم منفی کمک می‌کند. کلونی‌های یرسینیا انتروکولیتیکا معمولاً دارای یک “هدبور” (bull’s eye) یا ناحیه مرکزی تیره‌تر با حاشیه شفاف هستند که یک ویژگی تشخیصی مهم است.

کاربرد اصلی آن در میکروبیولوژی غذایی (برای بررسی آلودگی گوشت، شیر و محصولات لبنی) و در میکروبیولوژی تشخیصی بالینی (برای جداسازی یرسینیا از نمونه‌های مدفوع در موارد مشکوک به یرسینیوز) است. این محیط اغلب پس از یک مرحله غنی‌سازی در محیط مایع خاص (مانند سرم فسفات-سرم آلبومین) یا پس از انکوباسیون سرد (Cold Enrichment) استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، بسیار انتخابی و افتراقی (بر اساس تخمیر مانیتول و مورفولوژی کلونی) برای یرسینیا انتروکولیتیکا.
• هدف کشت: جداسازی و شناسایی اولیه یرسینیا انتروکولیتیکا (Yersinia enterocolitica) از نمونه‌های غذایی و مدفوع.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو می‌شود).
• ترکیبات کلیدی انتخابی: سف‌سولودین، ایروگاسان، نووبیوسین (مهارکننده طیف وسیعی از باکتری‌های رقیب). همچنین کریستال ویوله و نمک‌های صفراوی.
• ترکیبات کلیدی افتراقی: مانیتول (منبع کربوهیدرات)، قرمز خنثی (Neutral Red) (شاخص pH).
• مکانیسم افتراق: یرسینیا انتروکولیتیکا (تخمیر مانیتول منفی): کلونی‌های قرمز تا قرمز-صورتی با مرکز تیره و حاشیه شفاف (هدبور). تخمیرکننده‌های مانیتول (غیرهدف): کلونی‌های زرد با هاله زرد اطراف (اسیدی شدن محیط).
• شرایط کشت: کشت سطحی (Streak Plate) از نمونه یا از کشت غنی‌سازی شده.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ تا ۳۲ درجه سانتی‌گراد (دمای بهینه برای یرسینیا) به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. برخی پروتکل‌ها انکوباسیون در دمای اتاق (۲۵ درجه) را توصیه می‌کنند. انکوباسیون در ۳۷ درجه سانتی‌گراد ممکن است برخی سویه‌ها را مهار کند.
• خوانش نتیجه: یرسینیا انتروکولیتیکا (مشکوک): کلونی‌های کوچک (۱-۲ میلی‌متر)، قرمز-صورتی تا قرمز، با یک مرکز تیره (هدبور یا bull’s eye) و یک حاشیه شفاف. غیرهدف (تخمیرکننده مانیتول): کلونی‌های زرد. غیرهدف (مهار شده): عدم رشد یا کلونی‌های بسیار ریز.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تشکیل کلونی‌های مشخص با سویه Yersinia enterocolitica ATCC 9610 یا یک سویه شناخته شده (کنترل مثبت). مهار رشد یا کلونی‌های زرد با سویه Escherichia coli ATCC 25922 (کنترل منفی).
• کاربرد اصلی: جداسازی انتخابی Yersinia enterocolitica از مواد غذایی (به ویژه گوشت و لبنیات) و نمونه‌های مدفوع در تشخیص آزمایشگاهی و نظارت بهداشتی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Yersinia CIN Agar محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. برای تهیه محیط، پودر را در آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم به جوش آورید تا کاملاً حل شود (از جوشیدن طولانی مدت خودداری شود). سپس اتوکلاو کرده و تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد سرد کنید. بلافاصله در پلیت‌های استریل بریزید. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای مدت کوتاهی نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند و سطح آن‌ها خشک باشد. از آنجایی که یرسینیا ممکن است در نمونه‌ها کم باشد، اغلب یک مرحله غنی‌سازی (مانند کشت در سرم فسفات-سرم آلبومین به مدت ۲-۳ هفته در ۴ درجه سانتی‌گراد یا روش‌های غنی‌سازی دیگر) قبل از کشت روی CIN Agar انجام می‌شود. دمای انکوباسیون مهم است؛ دمای ۳۰-۳۲ درجه سانتی‌گراد بهتر از ۳۷ درجه است. کلونی‌های مشکوک (قرمز با هدبور) باید تأیید شوند، زیرا برخی گونه‌های غیربیماری‌زای یرسینیا یا سایر باکتری‌ها ممکن است شبیه به نظر برسند. تست‌های تأییدی شامل تست اوره‌آز مثبت (سریع)، تست اکسیداز منفی، و رشد در دماهای مختلف است. از آنجایی که CIN Agar ممکن است برخی سویه‌های یرسینیا را نیز مهار کند، استفاده از بیش از یک روش جداسازی توصیه می‌شود.