محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر ایبرسکو

محیط کشت براث پپتون واتر قلیایی نمکی (Alkaline Saline Peptone Water)

محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر Alkaline Saline Peptone Water (ASPW) که با نام اختصاری ASPW شناخته می‌شود، یک محیط غنی‌سازی انتخابی بر پایه تحمل بالای گونه‌های ویبریو به شرایط سخت است. فرمولاسیون این محیط حاوی پپتون به عنوان منبع غنی نیتروژن، ویتامین‌ها و اسیدهای آمینه، و کلرید سدیم با غلظت بالا (۲٪) برای تأمین فشار اسمزی مطلوب رشد ویبریوها می‌باشد. ویژگی انتخابی این محیط، pH قلیایی بالا (۸٫۶ ± ۰٫۲) است که رشد بسیاری از باکتری‌های فلور همراه را مهار کرده و شرایط ایده‌آلی را برای رشد ویبریوها فراهم می‌آورد. این محیط مطابق با استانداردهای بین‌المللی برای تشخیص ویبریوهای انتروپاتوژن در مواد غذایی فرموله شده است.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی مواد غذایی و آب به عنوان مرحله غنی‌سازی اولیه و ثانویه برای تشخیص گونه‌های ویبریو می‌باشد. پروتکل استاندارد شامل انکوباسیون اولیه در ۴۱٫۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶ ساعت، سپس تلقیح ۱ میلی‌لیتر از کشت اولیه به ۱۰ میلی‌لیتر محیط تازه و انکوباسیون مجدد به مدت ۱۸ ساعت در دمای ۴۱٫۵ درجه سانتی‌گراد (برای ویبریو پاراهمولیتیکوس و کلرا) یا ۳۷ درجه سانتی‌گراد (برای سایر گونه‌ها) است. پس از غنی‌سازی، کشت بر روی محیط جامد انتخابی TCBS Agar انجام می‌شود.

مشخصات کلیدی محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر

• نوع محیط: مایع (براث)، غنی‌سازی انتخابی برای گونه‌های ویبریو.
• هدف کشت: غنی‌سازی و تکثیر ویبریو کلرا، ویبریو پاراهمولیتیکوس و سایر گونه‌های بیماری‌زای ویبریو از نمونه‌های غذایی، آب و محیطی.
• حالت فیزیکی: پودر بژ، همگن و روان. تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا بجوشد و سپس اتوکلاو می‌شود.
• ترکیبات کلیدی (گرم/لیتر): پپتون (۲۰٫۰)، کلرید سدیم (۲۰٫۰).
• میزان مصرف: ۴۰٫۰ گرم در لیتر آب مقطر.
• pH نهایی: ۸٫۶ ± ۰٫۲ در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد.
• شرایط استریلیزاسیون: اتوکلاو در ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه.
• شرایط انکوباسیون: ۴۱٫۵ ± ۱ درجه سانتی‌گراد (برای محصولات تازه) یا ۳۷ ± ۱ درجه سانتی‌گراد (برای محصولات منجمد/نمکی) به مدت ۶ ± ۱ ساعت (مرحله اول) و ۱۸ ± ۱ ساعت (مرحله دوم).
• ظاهر محیط آماده: شفاف و بدون رسوب، به رنگ کهربایی روشن.
• خوانش نتیجه: مثبت: کدورت قابل مشاهده در محیط (رشد ویبریو). منفی: شفاف ماندن محیط. تأیید نهایی با کشت مجدد روی محیط جامد انتخابی و تست‌های بیوشیمیایی انجام می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد خوب با Vibrio cholerae، Vibrio parahaemolyticus و Vibrio vulnificus.
• کاربرد اصلی: مرحله غنی‌سازی اجباری در پروتکل استاندارد تشخیص گونه‌های ویبریو در مواد غذایی و آب؛ همچنین قابل استفاده به عنوان محیط غیرانتخابی برای کشت آئروموناس.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت آلکالین سالین پپتون واتر Alkaline Saline Peptone Water محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک و دور از رطوبت و نور مستقیم نگهداری شود. پودر مرطوب‌کننده است؛ پس از هر بار استفاده، درب ظرف محکم بسته شود. برای تهیه محیط، ۴۰ گرم پودر را در یک لیتر آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم و همزدن مداوم به جوش آورید تا کاملاً حل شود. سپس در لوله‌ها یا فلاسک‌های استریل توزیع کرده و در اتوکلاو با دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید. کنترل دقیق دمای انکوباسیون به ویژه در مرحله اول (۴۱٫۵ درجه سانتی‌گراد) برای مهار فلور همراه و انتخاب ویبریوها حیاتی است. برای محصولات منجمد یا نمکی، انکوباسیون در ۳۷ درجه سانتی‌گراد توصیه می‌شود. حجم انتقال از کشت اولیه به محیط ثانویه باید دقیقاً ۱ میلی‌لیتر به ۱۰ میلی‌لیتر باشد. پس از دوره انکوباسیون، بلافاصله کشت بر روی محیط TCBS Agar انجام شود. از آنجایی که این محیط یک محیط غنی‌سازی انتخابی است، عدم کدورت در مرحله اول لزوماً به معنای عدم حضور ویبریو نیست و مرحله غنی‌سازی ثانویه باید انجام شود. محیط آماده را می‌توان به مدت کوتاه در دمای ۲-۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد.