الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
آنتی هیومن گلبولین | تست کومبس
قیمت اصلی: 450,000 ریال بود.190,000 ریالقیمت فعلی: 190,000 ریال.
آنتی هیومن گلبولین یا گلبولین ضد انسانی، در تست کومبس مستقیم برای شناسایی سلول های قرمز خونی حساس شده با آنتی بادی کاربرد دارد.
تستا شاپ آنتی هیومن گلبولین را با برند بهار افشان عرضه می کند :
آنتی هیومن گلبولین
Anti-Human Globulin (AHG)
فهرست مطالب
آنتی هیومن گلبولین چیست؟
Anti-Human Globulin (AHG)
– For in vitro use only –
کاربرد: مشاهده آنتی بادی های ناقص ، وجود یا عدم وجود آلوآنتی بادی ، تست های عمومی سازگاری ، اثر در آزمایش مستقیم آنتی هیومن گلوبولین DTA و تست های سرولوژی بروسلوزو به روش تست کومبس
تستا شاپ آنتی هیومن گلبولین را با برند های مختلف و با کیفیت عرضه می کند :
برند: بهار افشان
قیمت: ۴۵۰۰۰۰ تومان ۱۹۰۰۰۰ تومان (فروش ویژه ۵۸% تخفیف)
گلبولین ضد انسانی یا آنتی هیومن گلبولین، در تست کومبس مستقیم برای شناسایی سلول های قرمز خونی حساس شده با آنتی بادی کاربرد دارد. همچنین در تست کومبس غیر مستقیم برای شناسایی آنتی بادی های تشکیل شده در سرم علیه گلبول های خونی را شناسایی می کند.
Anti-Human Globulin Anti-IgG برای آزمایش مستقیم آنتی هیومن گلبولین برای نشان دادن پوشش in vivo گلبول های قرمز خون با مولکول های آنتی بادی (مانند اتوآنتی بادی ها، آنتی بادی های مادر در بیماری همولیتیک نوزاد، آلوآنتی بادی ها علیه گلبول های قرمز در واکنش های انتقال خون) استفاده می شود.
Anti-Human Globulin Anti-IgG برای آزمایش آنتی هیومن گلبولین غیرمستقیم برای نشان دادن پوشش in vitro گلبول های قرمز با مولکول های آنتی بادی به عنوان در تشخیص و شناسایی آنتی بادی های غیرمنتظره و همچنین آزمایش های متقاطع استفاده می شود.
علاوه بر این، تایپ کردن آنتی ژن گروه خونی (با معرف آزمایشی مربوطه برای آزمایش آنتی هیومن گلبولین غیرمستقیم) می تواند انجام شود.
آزمایش آنتی گلبولون مستقیم و غیر مستقیم
مقدمه و اصول تست کومبس
مورشی اولین بار در سال ۱۹۰۸ استفاده از گلوبولین ضد انسانی را توصیف کرد. کومبز این آزمایش را در سال ۱۹۴۵ دوباره کشف کرد. با تزریق خرگوش باIgG انسانی، آنها توانستند پروتئینی (Anti-IgG) تولید کنند که با آنتی بادی های ناقص (IgG) واکنش نشان می داد.
بیشتر آنتی بادی‌های «ناقص» (IgG) نمی‌توانند گلبول‌های قرمز معلق در نمک را آگلوتینه کنند. اکثر آنتی بادی های مهم بالینی در سرولوژی گلبول های قرمز از کلاس IgG هستند و فقط با استفاده از Anti-IgG قابل شناسایی هستند. یک ساختار شبکه ای پایدار تشکیل می شود و زمانی که Anti-IgG به گلبول های قرمز حساس به IgG متصل می شود، آگلوتیناسیون اتفاق می افتد.
اصل آزمایش آزمایش هماگلوتیناسیون است. Anti-Human Globulin Anti IgG به عنوان یک پیوند بین پوشش آنتی بادی گلبول های قرمز مجاور عمل می کند و باعث آگلوتیناسیون می شود. گلبول های قرمز بدون پوشش آگلوتینه نمی شوند.
Anti-Human Globulin (AHG) از سرم خرگوش های ایمن شده با IgG خالص انسانی تهیه می شود تا آنتی IgG را ارائه دهد. فعالیت غیر اختصاصی در سرم خرگوش جذب و خارج می شود.
سپس ضد IgG با anti-C3d (BRIC 8) که یک آنتی بادی IgM است که از سلول‌های طحال یک موش واکسینه شده به دست می‌آید، ترکیب می‌شود. این مخلوط در محلول بافری مبتنی بر آلبومین گاوی نگهداری می شود.
تولید نسخه شفاف AHG سبز با افزودن erioglaucine و naphthol yellow S به مخلوط ساخته می شود.
روش آزمایش بر اساس اصل آگلوتیناسیون است، که در آن ایمونوگلوبولین های انسانی و/یا مکمل متصل به سطح گلبول قرمز در حضور AHG چند اختصاصی آگلوتینه می شوند که نشان دهنده یک نتیجه مثبت است.
زمانی که هیچ آگلوتیناسیونی وجود نداشته باشد که نشان دهنده حضور سلول های غیر حساس باشد، آزمایش منفی در نظر گرفته می شود. به منظور خلاص شدن از شر گلوبولین های نامحدود، گلبول های قرمز در طول آزمایش به طور کامل با سالین بافر شسته می شوند.
این آزمایش عمدتاً برای استفاده در آزمایش های آنتی گلوبولین لوله ای در نظر گرفته شده است. دو روش برای آزمایش وجود دارد. روش مستقیم برای نشان دادن حساسیت درون تنی سلول ها از بیماران یا اهداکنندگان استفاده می شود. روش غیر مستقیم برای نشان دادن حساسیت در شرایط آزمایشگاهی استفاده می شود
سلول‌ها، آزمایش‌ها شامل تشخیص و شناسایی آنتی‌بادی، آزمایش سازگاری، آزمایش Du و سایر آزمایش‌های تشخیص آنتی‌ژن است. روش غیر مستقیم با مرحله انکوباسیون قبل از افزودن آنتی گلوبولین مشخص می شود.
گلبول های قرمز نشان داده شده مثبت با روش مستقیم نباید در روش غیر مستقیم استفاده شوند. هر دو روش در زیر توضیح داده شده است.
موارد احتیاط
- این معرف از منابع حیوانی مشتق شده است، بنابراین باید در استفاده و دفع این معرف دقت لازم صورت گیرد، زیرا هیچ روش آزمایشی شناخته شده ای وجود ندارد که بتواند عدم وجود عوامل عفونی را تضمین کند.
- معرف باید در یخچال بین ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری شود. هرگز منجمد یا در معرض دمای بالا قرار ندهید.
- اگر معرف با کدورت مشخص شده است استفاده نکنید زیرا ممکن است نشان دهنده خراب شدن یا آلودگی معرف باشد.
- معرف حاوی ۰.۱ درصد سدیم آزید است که سمی است و می تواند از طریق پوست جذب شود. پس از تخلیه، زهکش ها باید کاملاً با آب شسته شوند.
- معرف ها باید به صورت عرضه شده و مطابق با آن استفاده شوند
- بیش از تاریخ انقضا استفاده نکنید
آماده سازی نمونه
از هر روش فلبوتومی قابل قبولی می توان برای کشیدن نمونه استفاده کرد. برای روش آزمایش مستقیم، نمونه ها باید به داخل EDTA، ACD، CPD یا CPDA-1 کشیده شوند و ظرف ۲۴ ساعت آزمایش شوند. نمونه های لخته شده توصیه نمی شود و نتایج باید با احتیاط در هنگام استفاده از نمونه های لخته شده تفسیر شوند.
برای روش های غیرمستقیم، باید از نمونه لخته شده به دست آمده از سرم تازه استفاده شود. برای جلوگیری از نتایج نادرست به دلیل نگهداری و جابجایی نامناسب، آزمایش باید در اسرع وقت انجام شود. اگر آزمایش به تأخیر افتاد، نمونه ها باید در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری شوند و در داخل آن آزمایش شوند
دو روز مشروط بر اینکه شواهدی از همولیز وجود نداشته باشد یا باید به صورت یخ زده نگهداری شود. در این صورت گلبول های قرمز باید از سرم خارج شوند.
روش های انجام تست:
آزمایش مستقیم
۱. گلبول های قرمز آزمایش شده را ۳ بار با سالین ایزوتونیک (NaCl 0.9%) بشویید و یک سوسپانسیون ۵% (v/v) در محلول سالین ایزوتونیک (NaCl 0.9%) تهیه کنید.
۲. ۵۰ میکرولیتر از سوسپانسیون تهیه شده در مرحله ۱ را به یک لوله آزمایش انتقال دهید.
۳. در مرحله ۲، ۱۰۰ میکرولیتر از معرف AHG را به لوله آزمایش اضافه کنید.
۴. اجازه دهید لوله به مدت ۵ دقیقه در دمای اتاق (۲۵-۱۸ درجه سانتیگراد) انکوبه شود.
۵. لوله را به آرامی تکان دهید تا مخلوط یکدست شود.
۶. در ۱۲۰ گرم به مدت ۱ دقیقه سانتریفیوژ کنید.
۷. با تکان دادن آرام لوله به صورت ماکروسکوپی بخوانید تا گلوله گلبول قرمز جدا شود.
کاربردهای آزمایش آنتی گلوبولین مستقیم
- تشخیص HDN در نوزادان
- تشخیص کم خونی همولیتیک خودایمنی
- تشخیص کم خونی همولیتیک ایمنی ناشی از دارو
- بررسی واکنش همولیتیک انتقال خون
آزمایش غیرمستقیم
اگر از یک محیط تقویت کننده (آلبومین، (LISS) استفاده می شود، لطفاً به دستورالعمل های مربوطه برای استفاده مراجعه کنید.
۱. سوسپانسیون ۳ تا ۵ درصد از گلبول های قرمز را در محلول سالین ایزوتونیک تهیه کنید.
۲. یک قطره از سوسپانسیون گلبول های قرمز را در یک لوله مشخص شده بریزید و ۲ قطره سرم را برای آزمایش (یا طبق دستورالعمل برای معرف آزمایش) به آن اضافه کنید.
۳. در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۳۰ تا ۶۰ دقیقه یا به میزان مناسب با معرف تقویت کننده مورد استفاده قرار دهید.
۴. گلبول های قرمز را ۳ بار با سالین ایزوتونیک بشویید. نمک رویی را به طور کامل تخلیه کنید.
۵. ۲ قطره Anti-Human Globulin Anti-IgG را به گلبول های قرمز بسته بندی شده اضافه کنید و مخلوط کنید.
۶. سانتریفیوژ به مدت ۲۰ ثانیه در ۸۰۰ – ۱۰۰۰ x g.
۷. دکمه گلبول قرمز را به آرامی بیرون بیاورید و آگلوتیناسیون را مشاهده کنید.
۸. نتایج را ثبت کنید
کاربردهای تست آنتی گلوبولین غیر مستقیم
- تشخیص و شناسایی آنتی بادی های غیرمنتظره در سرم
- تطبیق ضربدری
- تایپ آنتی ژن های گلبول قرمز جزئی مانند دافی، کل، کید
- تشخیص D ضعیف (آزمایش Du قبلی)
- تیتراسیون آنتی بادی ها
- • Anti-D در سرم مادر در HDN
بررسی نتیجه تست کومبس
مثبت: اگر آگلوتیناسیون ظاهر شود.
منفی: اگر آگلوتیناسیون مشاهده نشود.
نتایج مثبت نشان دهنده وجود IgG انسانی یا اجزای مکمل بر روی گلبول های قرمز خون است. در آزمایش مستقیم، نتیجه منفی لزوماً بیماری همولیتیک نوزاد (HDN) را رد نمی کند، به خصوص در مواردی که مشکوک به ناسازگاری ABO باشد.
در روش غیر مستقیم تست کومبس، نتایج منفی کاذب هنگام شستشو با سالین ایزوتونیک که در کیسه های پلاستیکی استریل تهیه شده است که عمدتاً برای آبیاری و داخل وریدی طراحی شده اند، مشاهده شده است. استفاده یا شستشو با محلول های در نظر گرفته شده برای آزمایش های شمارش و اندازه سلول.
تمام نتایج منفی یا ضعیف مثبت باید با استفاده از گلبول های قرمز حساس به IgG (به عنوان مثال سلول های کنترل کومبس) تایید شوند.
محدودیت های تست کومبس
نتایج مثبت/منفی کاذب ممکن است از آلودگی مواد آزمایش، نگهداری نامناسب مواد آزمایش، شستشوی نامناسب، زمان یا دمای نامناسب جوجه کشی، تأخیر در خواندن نتایج، یا هرگونه انحراف از روش های آزمایش توصیه شده رخ دهد.
سانتریفیوژ نادرست نیز ممکن است باعث نتایج نادرست شود. زمان های سانتریفیوژ ذکر شده فقط باید به عنوان پیشنهاد در نظر گرفته شود. زمان سانتریفیوژ مناسب باید باشد.
مشخص می شود که قوی ترین واکنش آنتی بادی با سلول های آنتی ژن مثبت را ایجاد می کند و در عین حال امکان تعلیق مجدد آسان گلبول های قرمز آنتی ژن منفی را فراهم می کند.
برای تایید واکنش پذیری و اختصاصی بودن AHG، توصیه می شود گلبول های قرمز حساس و غیر حساس IgG با معرف در هر روز استفاده آزمایش شوند.
۱.Pittiglio, D. Harmening. Modern Blood Banking and Transfusion Practices. Philadelphia, PA: F.A. Davis, 1983.
۲.Mark E. Brecher, MD et al. Technical Manual 15th Edition, Bethesda, MA: AABB, 2005.
Coombs Test: Purpose, Procedure, and Results (healthline.com)
3 دیدگاه برای آنتی هیومن گلبولین | تست کومبس
بهرام –
سپاس از توضیحات مفید و ارزشندتون
رضایی –
با سلام شما برند بهار افشان رو پیشنهاد میکنید یا انتقال؟
دانشجو دانشگاه شهید بهشتی رضایی
testa_admin –
سلام
این دو برند مناسب و با کیفیت هستند. اما با توجه به قیمت و ارز دولتی پیشنهاد تستا استفاده از برند ایمونو آلمان می باشد. برندی با کیفیت و قیمت مناسب.
توسعه سلامت توان آفرین
MARYAM –
ممنون میشم سفارش من رو زودتر ببینید.
testa_admin –
سلام – پی گیری شد.