تست کواگولاز | پلاسمای انعقادی خرگوش | COAGULASE Test

پلاسمای خرگوش چیست؟

RABBIT COAGULASE PLASMA

پلاسمای کواگولاز خرگوش یک پلاسمای استاندارد شده و لیوفیل شده خرگوش است برای تشخیص کیفی آنزیم کواگولاز تولید شده توسط استافیلوکوکوس اورئوس استفاده می شود.

تست کواگولاز چیست؟

آزمایش کواگولاز یک آزمایش بیوشیمیایی است که برای افتراق استافیلوکوکوس اورئوس از سایر گونه های استافیلوکوک مانند S. اپیدرمیدیس و S. saprophyticus بر اساس توانایی تولید آنزیم کواگولاز استفاده می شود.

تست کواگولاز یک آزمایش مهم است که گونه های جنس استافیلوکوک را به دو گروه متمایز می کند. استافیلوکوک کواگولاز مثبت و استافیلوکوک کواگولاز منفی. آنزیم کواگولاز در برخی از ارگانیسم ها به عنوان یک عامل حدت بیماری عمل می کند زیرا با فیبرینوژن موجود در سطح سلول میزبان تعامل دارد.

ارگانیسم های دارای کواگولاز معمولاً دارای یک سد محافظ در اطراف خود هستند که باعث افزایش بیماری زایی و مقاومت آنها در برابر سیستم ایمنی می شود.

کواگولاز دو نوع است. کواگولاز آزاد (free) و کواگولاز محدود  (bound) که هر کدام با روش های مختلفی شناسایی می شوند.

کواگولاز bound را فاکتور کلمپینگ می نامند و به سرعت با تست اسلاید تشخیص داده می شود. کواگولاز آزاد نیز به نوبه خود در نتیجه تشکیل لخته در لوله آزمایش شناسایی می شود.

شدت یا مضر بودن یک بیماری یا سم.

خلاصه و توضیح آزمایشات

 تمایز استافیلوکوکوس اورئوس از گونه کواگولاز منفی، از جمله استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس و استافیلوکوکوس ساپروفیتیکوس، نه تنها به این دلیل که استافیلوکوکوس یک خطر مهم برای سلامتی است، بلکه به این دلیل که گونه های اخیر به طور فزاینده ای با سپتی سمی، اندوکاردیت باکتریایی، کلونیزاسیون پروتزها و عفونت های دستگاه ادراری مرتبط هستند، بسیار مهم است. شناسایی استافیلوکوک ها بر اساس مورفولوژی ، خصوصیات کشت و بیوشیمیایی و بررسی میکروسکوپی است.

با این حال، تشخیص کواگولاز پرکاربردترین معیار برای تمایز بین گونه‌ها است. توانایی استافیلوکوک در تولید کواگولاز، آنزیمی که قادر به انعقاد پلاسما است، اولین بار توسط لوب در سال ۱۹۰۳۲ گزارش شد.

از آن زمان، بسیاری از محققین تلاش کرده اند تولید کواگولاز را با بیماری زایی استافیلوکوک ها مرتبط کنند.

چاپمن، برنز، نیلسون و کورسیو، در مطالعه‌ای در مورد تولید کواگولاز و همولیزین توسط استافیلوکوک، نشان دادند که سویه‌های تولیدکننده کواگولاز، صرف نظر از خواص همولیتیک یا کروموژنیک، معمولاً بیماری‌زا هستند.

تجربه جدیدتر نشان داده است توانایی استافیلوکوک ها در تولید کواگولاز نمی تواند همیشه نشان دهنده بیماری زایی آن باشد.

چرا از پلاسمای خرگوش در آزمایش کواگولاز استفاده می شود؟

کواگولاز پلاسمای خرگوش لیوفیلیزه شده است که EDTA به عنوان ضد انعقاد به آن اضافه شده است. EDTA توسط باکتری ها استفاده نمی شود و بنابراین باعث واکنش های کواگولاز مثبت کاذب توسط باکتری هایی که از سیترات استفاده می کنند، نمی شود.

اصول تست

استافیلوکوکوس اورئوس دو نوع کواگولاز آزاد و محدود تولید می کند.

کواگولاز آزاد یک آنزیم خارج سلولی است که هنگام کشت ارگانیسم در آبگوشت تولید می شود.

کواگولاز محدود، به عنوان عامل کلمپینگ شناخته می شود و متصل به دیواره سلولی ارگانیسم باقی می ماند.

آزمایش لوله با افزودن ۲-۴ کلنی از ایزوله به یک لوله حاوی پلاسمای کواگولاز rehydated و انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت حداکثر چهار ساعت انجام می شود.

تشکیل لخته نشان دهنده تولید کواگولاز است.

آزمایش لوله ای به دلیل دقت بیشتر به دلیل توانایی آن در تشخیص کواگولاز آزاد و متصل، متداول ترین روش مورد استفاده است.

آزمایش لام با ساختن سوسپانسیون سنگین از ایزوله آزمایش در یک قطره نمک بر روی یک لام شیشه ای تمیز و سپس اضافه کردن یک قطره پلاسما انجام می شود.

سپس به آرامی با یک حلقه مخلوط می شود و از نظر توده ای یا تشکیل کلمپ بررسی می شود. این آزمایش دقت کمتری نسبت به آزمایش لوله دارد و نیاز دارد که تمام آزمایشات منفی توسط آزمایش لوله تأیید شود.

 این آزمایش فقط کواگولاز متصل را تشخیص می دهد.