خرید کیت الایزا فولات | کیت فولیک اسید | کیت اسید فولیک مونوسنت

کیت اسید فولیک مونوسنت

Folate ELISA TEST SYSTEM

پیشنهاد تستا جهت خرید کیت الایزا فولات استفاده از کیت اسید فولیک مونوسنت است. توضیحاتی که در ادامه خواهد آمد مربوط به این نوع کیت است. 

حیطه کاربرد:

سیستم تست ELISA فولات به منظور تعیین کمی اسید فولیک در سرم و پلاسمای انسان در نظر گرفته شده است. کیت فولیک اسید از پنل کیت های کم خونی الایزا محسوب می گردد.

 اساس تست:

کیت تست فولات یک روش ایمنی سنجی مرتبط با آنزیم فاز جامد (ELISA)، بر اساس اصل اتصال رقابتی است.

Translation is too long to be saved

چاهک های پوشش داده شده با استرپتاویدین با استانداردهای فولات استخراج شده، شاهد، نمونه ها، کنژوگه پروتئین اتصال دهنده فولات-بیوتین و کونژوگه فولات-آنزیم در دمای اتاق به مدت ۶۰ دقیقه انکوبه می شوند.

در طول انکوباسیون، مزدوج فولات-آنزیم و فولات موجود در نمونه، سرم استاندارد یا کنترل کیفیت برای اتصال به پروتئین اتصال دهنده فولات نشاندار شده با بیوتین با یکدیگر رقابت خواهند کرد.

پس از انکوباسیون ۶۰ دقیقه ای، تمام مزدوجات متصل نشده برداشته شده و چاهک ها شسته می شوند.

سپس محلولی از معرف TMB اضافه می شود و به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه می شود و در نتیجه رنگ آبی ایجاد می شود.

پیشرفت رنگ با افزودن محلول توقف متوقف می شود و جذب به روش اسپکتروفتومتری در ۴۵۰ نانومتر اندازه گیری می شود.

منحنی استاندارد با رسم غلظت استاندارد در مقابل جذب به دست می آید.

  شدت رنگ با مقدار فولات موجود در نمونه نسبت معکوس دارد. کل زمان اجرای روش سنجش ۱.۲۵ ساعت است.

مواد و اجزاء  کیت فولیک اسید:

• ریز چاهک های پوشش داده شده با استرپتاویدین (12x8x1)
• مجموعه استاندارد فولات: ۶ ویال (آماده استفاده) ۰.۵ میلی لیتر
• معرف پروتئین اتصال دهنده فولات بیوتینیله،۱ بطری (آماده استفاده) ۷ میلی لیتر
• فولات-آنزیم کونژوگه، ۱ بطری (آماده برای استفاده) ۷ میلی لیتر
• بافر استخراج، ۱ بطری (آماده استفاده) ۸ میلی لیتر
• بافر خنثی سازی، ۱ بطری (آماده استفاده) ۸ میلی لیتر
• محلول TCEP، ۱ بطری (40x)   ۰.۲۵ میلی لیتر
• محلول توقف، ۱ بطری (آماده استفاده) ۱۲ میلی لیتر
• سوبسترا TMB، ۱ بطری (آماده استفاده) ۱۲ میلی لیتر
• کنسانتره شستشو ۱ بطری (20x) 25 میلی لیتر

مواد مورد نیاز که در کیت موجود نمی باشد:

• پیپت های دقیق
• نوک پیپت یکبار مصرف
• ELISA reader قادر به خواندن جذب در 450nm
• میکسر ورتکس سر تخت
• پلیت شیکر
• لوله های آزمایش برای آماده سازی نمونه

موارد احتیاط در کار با کیت فولیک اسید:

1. مواد بالقوه خطرناک زیستی:  کالیبراتور و کنترل ها شامل ترکیباتی با منشاء انسانی که برای آنتی ژن سطحی هپاتیت B و همچنین آنتی بادی HIV  با معرف های دارای مجوز FDA آزمایش شده و غیر واکنشی هستند.
2. با این حال، از آنجایی که هیچ روش آزمایشی وجود ندارد که بتواند اطمینان کامل از نبود HIV، ویروس هپاتیت B یا سایر عوامل عفونی ارائه دهد، این معرف‌ها باید در سطح ایمنی زیستی ۲ مورد استفاده قرار گیرند، همانطور که در مراکز کنترل بیماری/موسسه ملی بهداشت توصیه شده است. کتابچه راهنمای “ایمنی زیستی در آزمایشگاه های میکروبیولوژیکی و زیست پزشکی.” ۱۹۸۴
3. این کیت برای اندازه گیری مقدار فولات در سرم انسان در نظر گرفته شده است
4. از طریق دهان پیپت نکنید. در این مناطق که در آن نمونه ها یا واکنشگرهای کیت استفاده می شود از خوردن، آشامیدن و سیگار کشیدن خودداری کنید.
5. اجزای این کیت برای استفاده به عنوان یک واحد انتگرال در نظر گرفته شده است. اجزای لات های مختلف نباید با هم مخلوط شوند.
6. اجزای این کیت را از نور و قرار گرفتن در معرض هوا به مدت طولانی محافظت کنید.
7. توصیه می شود نمونه های استاندارد، شاهد و سرم در دو تکرار انجام شود. (به صورت تکراری اجرا شود)
8. نتایج بهینه با رعایت دقیق دستورالعمل های این پروتکل به دست خواهد آمد.
9. پیپت کردن دقیق و صحیح و همچنین رعایت زمان و دمای دقیق مورد نیاز ضروری است. هر گونه انحراف از این ممکن است داده های نامعتبر به همراه داشته باشد.

جمع آوری نمونه

• می توان از نمونه های سرم، پلاسمای هپارینه شده یا پلاسمای EDTA برای سنجش استفاده کرد.
• برای سرم، خون کامل را با استفاده از رگ گیری جمع آوری کنید و اجازه دهید لخته شود.
• برای پلاسما، نمونه را قبل از سانتریفیوژ به آرامی وارونه کنید. سپس سانتریفیوژ کنید و سرم یا پلاسما را پس از جمع آوری سریع از آن جدا کنید. از نمونه های همولیز شده استفاده نکنید.
• نمونه ها را می توان به مدت دو هفته در دمای ۸-۲ درجه سانتیگراد در یخچال نگهداری کرد.
•   برای نگهداری طولانی مدت، آنها را می توان در۲۰- درجه سانتی گراد نگهداری کرد.
•   از تکرار چرخه های انجماد و ذوب خودداری کنید. قبل از استفاده، اجازه دهید نمونه های سرد شده یا منجمد شده به مدت ۳۰ دقیقه در دمای اتاق متعادل شوند. نمونه ها باید قبل از آنالیز مخلوط شوند.

آماده سازی معرف

قبل از اجرای آزمون با استفاده از محتویات کیت الایزا فولات، موارد زیر را آماده کنید:

۱. عامل استخراج:

بلافاصله قبل از استفاده، مقداری از محلول TCEP را به نسبت ۱:۴۰ با بافر استخراج رقیق کنید. به عنوان مثال، برای تهیه ۱ میلی لیتر از عامل استخراج، ۲۵ uL محلول TCEP را به ۹۷۵ uL بافر استخراج اضافه کنید.

۲. استخراج نمونه:

به اندازه کافی از لوله های آزمایش را برای هر یک از استانداردها، نمونه ها و کنترل ها برچسب بزنید.

۵۰ uL از هر نمونه را برای آزمایش به لوله های جداگانه اضافه کنید.

پس از اضافه شدن تمام نمونه ها، ۲۵ uL از معرف استخراج را به هر نمونه پیپت کنید.

پس از هر بار اضافه کردن لوله آزمایش را ورتکس کنید. اجازه دهید استخراج به مدت ۱۵ دقیقه ادامه یابد.

 پس از ۱۵ دقیقه، ۲۵ uL بافر خنثی سازی را به هر نمونه پیپت کنید. پس از هر بار اضافه کردن لوله آزمایش را ورتکس کنید.

 اجازه دهید نمونه ها به مدت ۵ دقیقه بماند تا از خنثی شدن کامل اطمینان حاصل شود. همه حجم ها را برای نمونه ها دو برابر کنید تا به صورت تکراری اجرا شوند.

 توجه: زمان‌های استخراج ثابت به منظور دست یابی به نتایج سنجش سازگار ضروری است.

۳. کنژوگه آنزیم فولات:

آنزیم کنژوگه لیوفیلیزه را با ۰.۵ میلی لیتر آب مقطر (14X) دوباره بسازید.

سپس یک 1X را با افزودن تمام ۰.۵ میلی لیتر آنزیم بازسازی شده آماده کنید

کنسانتره کنژوگه به بطری رقیق کننده آنزیم ارائه شده یا بسته به تعداد نوارها/ چاهکهای استفاده شده، مقدار مورد نظر از مواد بازسازی شده را ۱:۱۴ برابر با آنزیم رقیق کننده، در صورت نیاز رقیق کنید.

محصول آماده استفاده 1X به مدت ۱ سال پایدار است و پس از رقیق شدن در دمای ۲-۸ درجه سانتیگراد نگهداری می شود. هر گونه کنسانتره آنزیمی بازسازی شده باقیمانده را در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد یا کمتر از آن برای استفاده بعدی منجمد کنید.

از چرخه های مکرر انجماد / ذوب مواد غلیظ خودداری کنید.

۴. آماده کردن محلول شستشو:

با افزودن محتویات بطری (۲۵ میلی لیتر، 20X) به ۴۷۵ میلی لیتر آب مقطر یا دیونیزه بافر شست و شوی 1X آماده کنید.

 در دمای اتاق (۲۰-۲۵ درجه سانتیگراد) نگهداری شود.

روش آزمایش:

هنگام استفاده از کیت اسید فولیک مونوسنت، مراحل زیر انجام می گیرد:

1. همه معرف ها و نمونه ها باید قبل از استفاده به دمای اتاق برسد.
2. همه معرف ها باید به آرامی و بدون کف کردن مخلوط شوند. پس از شروع روش، تمام مراحل باید بدون وقفه انجام شوند.
3. تعداد مورد نظر نوار پوشش داده شده را در نگهدارنده قرار دهید.
4. ۵۰ میکرولیتر فولات استخراج شده استاندارد، کنترل و نمونه ها در چاهکهای مناسب توزیع کنید.
5. ۵۰ میکرولیتر از مزدوج آنزیم را در هر چاهک بریزید.
6. ۵۰ میکرولیتر از کونژوگه پروتئین اتصال دهنده فولات بیوتینیلاسیون را به هر چاهک توزیع کنید.
7. میکروپلیت را به مدت ۲۰-۳۰ ثانیه به آرامی تکان دهید تا مخلوط شود.
8. پوشش دهید و به مدت ۶۰ دقیقه در دمای اتاق (۲۰-۲۵ درجه سانتیگراد) انکوبه کنید.
9. محتویات چاهکها را به سرعت تکان دهید. چاهک ها را ۳بار با بافر 1X شستشو دهید.
10. چاهکها را به شدت روی کاغذ جاذب بکوبید تا قطرات آب باقیمانده از بین برود.
11. با استفاده از یک پیپت چند کاناله، ۱۰۰ میکرولیتر سوبسترا TMB را در هر چاهک توزیع کنید.
12. به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق، ترجیحا در مکان تاریک انکوباسیون کنید.
13. ۵۰ میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید و به آرامی مخلوط کنید تا یک رنگ یکنواخت، در هر چاهک، به دست آید.
14. پس از افزودن محلول توقف میزان جذب را در هر چاهک در ۴۵۰ نانومتر در عرض ۱۵ دقیقه بخوانید.

منحنی استاندارد کیت اسید فولیک مونوسنت:

شش سطح استاندارد برای هر run گنجانده شده است. یک استاندارد معمولی منحنی در زیر نشان داده شده است.