محیط کشت آرژینین دکربوکسیلاز براث

محیط کشت براث دکربوکسیلاز آرژینین (Arginine Decarboxylase Broth)

محیط کشت Arginine Decarboxylase Broth بر اساس فرمول Moeller طراحی شده است و به طور خاص برای آزمایش دکربوکسیلاسیون آرژینین (یک تست از سری تست‌های دکربوکسیلازی) کاربرد دارد. این محیط حاوی مقدار دقیقی از آرژینین، گلوکز (به عنوان کربوهیدرات تخمیرپذیر برای تحریک متابولیسم و تولید اسید اولیه)، عصاره مخمر و پپتون به عنوان منابع رشد، و پیریدوکسال به عنوان کوفاکتور آنزیمی است. شناساگر بروموکرزول پرپل تغییرات pH را نشان می‌دهد.

مکانیسم تست بدین صورت است: باکتری ابتدا گلوکز را تخمیر کرده و محیط را اسیدی می‌کند (تغییر رنگ به زرد). اگر باکتری دارای آنزیم دکربوکسیلاز آرژینین باشد، این اسید آمینه را به آگماتین و سپس به پوترسین دکربوکسیله می‌کند. این آمین‌های قلیایی، محیط اسیدی اولیه را خنثی کرده و مجدداً قلیایی می‌کنند (بازگشت رنگ به بنفش/ارغوانی). عدم بازگشت رنگ نشانه عدم وجود آنزیم است. این تست برای افتراق بین جنس‌های مهمی مانند Salmonella (معمولاً مثبت) از Escherichia (معمولاً منفی) و نیز تفکیک درون جنس‌هایی مانند Klebsiella و Enterobacter حیاتی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، بیوشیمیایی/تشخیصی
• هدف کشت: تشخیص آنزیم دکربوکسیلاز آرژینین در باکتری‌ها، به ویژه انتروباکتریاسه
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، آرژینین، گلوکز، پیریدوکسال، شناساگر بروموکرزول پرپل
• شرایط کشت: لوله‌های محیط باید با یک لایه روغن معدنی یا پارافین مایع پوشانده شوند تا شرایط بی‌هوازی (میکروآئروفیلیک) لازم برای فعالیت آنزیم فراهم شود.
• شرایط انکوباسیون: 35 تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت، با خوانش نتایج در ۱۸-۲۴ ساعت و مجدداً در ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: مثبت: رنگ ارغوانی یا خاکستری-ارغوانی (قلیایی). منفی: رنگ زرد ماندگار (اسیدی). زرد شدن اولیه و سپس بازگشت به ارغوانی یک نتیجه مثبت قطعی است.
• کنترل کیفیت: مثبت: Salmonella Typhimurium، منفی: Escherichia coli.
• کاربرد اصلی: بخشی از تست‌های دکربوکسیلازی برای شناسایی و تفکیک باکتری‌های روده‌ای.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت Arginine Decarboxylase Broth باید در جای خشک و خنک و دور از نور نگهداری شود. محیط آماده شده را می‌توان در لوله‌های کوچک (حدود ۳-۴ میلی‌لیتر) تقسیم، استریل و سپس با یک لایه ۱۰-۱۵ میلی‌متری روغن معدنی استریل پوشانده کرد. لوله‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری نمود. قبل از تلقیح، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. برای تلقیح از کشت تازه باکتری (۱۸-۲۴ ساعته) استفاده شده و پس از تلقیح، لوله به آرامی تکان داده می‌شود. تفسیر نتیجه پس از ۱۸-۲۴ ساعت اولیه بسیار مهم است، زیرا برخی از گونه‌ها واکنش دیررس دارند. لوله کنترل بدون آرژینین نیز برای برخی گونه‌های مشکوک توصیه می‌شود.