محیط کشت آسپاراژین پرولین براث

محیط کشت براث آسپاراژین پرولین (Asparagine Proline Broth)

محیط کشت Asparagine Proline Broth یک محیط حداقل (Minimal Medium) است که حاوی دو اسید آمینه آسپاراژین و پرولین به عنوان منابع اصلی نیتروژن و پیش‌ساز کربن است. این محیط فاقد منابع پیچیده آلی است و بنابراین رشد باکتری در آن منوط به داشتن سیستم‌های آنزیمی لازم برای متابولیزه کردن این اسیدهای آمینه خاص می‌باشد. اساس کار این است که برخی باکتری‌ها توانایی استفاده از یکی یا هر دوی این منابع را دارند و این الگوی رشد می‌تواند به عنوان یک صفت تشخیصی ارزشمند عمل کند.

کاربرد اصلی این محیط در تحقیقات میکروبی و طبقه‌بندی باکتری‌هاست. به عنوان مثال، در مطالعه باکتری‌های جنس Streptomyces یا سایر اکتینومیست‌های تولیدکننده آنتی‌بیوتیک، الگوی رشد در این محیط می‌تواند اطلاعاتی در مورد پتانسیل متابولیکی آن‌ها ارائه دهد. همچنین، در مطالعه باکتری‌های همزیست ریشه گیاهان (ریزوبیوم‌ها) یا باکتری‌های محرک رشد گیاه (PGPR)، توانایی استفاده از اسیدهای آمینه خاص مانند پرولین می‌تواند با تحمل به تنش‌های محیطی مانند خشکی یا شوری مرتبط باشد. این محیط به ندرت در تشخیص‌های روتین بالینی استفاده می‌شود و بیشتر یک ابزار تخصصی پژوهشی و تاکسونومیکی محسوب می‌گردد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، بیوشیمیایی/تشخیصی (محیط حداقل)
• هدف کشت: بررسی توانایی همزمان یا مجزای باکتری در استفاده از آسپاراژین و پرولین به عنوان منابع رشد
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر)
• ترکیبات کلیدی: آسپاراژین، پرولین، نمک‌های معدنی ضروری (فسفات، منیزیم، سولفات)، گاهی اوقات گلیسرول یا گلوکز به مقدار کم به عنوان استارتر کربنی
• شرایط کشت: معمولاً در لوله‌های درپیچ دار یا ارلن‌های کوچک کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: بسته به باکتری هدف متفاوت است (معمولاً ۲۸ تا ۳۰ درجه سانتی‌گراد برای باکتری‌های خاکی، یا ۳۷ درجه سانتی‌گراد برای پاتوژن‌ها) به مدت ۳ تا ۷ روز یا بیشتر.
• خوانش نتیجه: ارزیابی بر اساس وجود یا عدم وجود رشد (کدورت) در مقایسه با کنترل منفی (محیط تلقیح نشده) و گاهی اوقات کنترل‌های مثبت حاوی یک منبع کربن/نیتروژن عمومی مانند عصاره مخمر. رشد قابل توجه نشانه مثبت است.
• کنترل کیفیت: با توجه به کاربرد تخصصی، کنترل‌های مثبت و منفی بسته به باکتری مورد مطالعه تعریف می‌شوند. مثلاً یک سویه شناخته شده از Streptomyces griseus ممکن است به عنوان کنترل مثبت استفاده شود.
• کاربرد اصلی: مطالعات فیزیولوژیکی و تاکسونومیکی باکتری‌ها، تحقیقات در زمینه اکتینومیست‌ها و باکتری‌های مرتبط با گیاه.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت Asparagine Proline Broth به دلیل ترکیب شیمیایی دقیق، باید در ظروف کاملاً درب‌بسته و در جای خشک نگهداری شود. برای تهیه محیط، استفاده از آب مقطر با خلوص بالا توصیه می‌شود. از آنجایی که این یک محیط حداقل است، هرگونه آلودگی یا باقی‌مانده مواد آلی در ظروف می‌تواند منجر به نتایج مثبت کاذب شود، لذا شستشو و استریل کردن دقیق ظروف کشت ضروری است. برای تلقیح، بهتر است از سوسپانسیون باکتری که در یک محیط حداقل شسته شده یا از فاز لگاریتمی رشد در یک محیط فقیر تهیه شده است، استفاده گردد تا منابع ذخیره شده داخلی باکتری حداقل باشد. انکوباسیون اغلب نیاز به زمان طولانی دارد و لوله‌ها باید در برابر تبخیر محافظت شوند. ارزیابی رشد ممکن است به صورت بصری (کدورت)، اندازه‌گیری جذب نوری (OD) یا حتی خشک کردن و توزین زیست‌توده باشد. تفسیر نتایج همیشه باید در مقایسه با کنترل‌های مناسب انجام گیرد.