محیط کشت اسکولین آیرون آگار

محیط کشت افتراقی اسکولین آهن آگار (Esculin Iron Agar)

محیط کشت Esculin Iron Agar یک محیط پایه (معمولاً حاوی پپتون و عصاره گوشت) است که با اسکولین (Aesculin) و یک نمک آهن (معمولاً سیترات آمونیوم فریک) غنی شده است. اصل تست بر اساس تولید آنزیم اسکولیناز (β-glucosidase) توسط برخی باکتری‌هاست. این آنزیم گلیکوزید اسکولین را به اسکولتین (۶,۷-dihydroxycoumarin) و گلوکز هیدرولیز می‌کند. اسکولتین آزاد شده سپس با یون آهن سه‌ظرفیتی (Fe³⁺) موجود در محیط واکنش داده و یک کمپلکس فنولی سیاه-قهوه‌ای نامحلول تشکیل می‌دهد. بنابراین، هیدرولیز اسکولین با سیاه شدن کل محیط یا حداقل ناحیه اطراف رشد باکتری نشان داده می‌شود. عدم تغییر رنگ نشان‌دهنده عدم فعالیت آنزیم است. این محیط اغلب برای تست انتروکوک‌ها (که معمولاً مثبت هستند) و افتراق آنها از استرپتوکوک‌های گروه A (که معمولاً منفی هستند) استفاده می‌شود. همچنین می‌تواند برای تست بی‌هوازی‌هایی مانند Bacteroides fragilis (مثبت) مورد استفاده قرار گیرد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی به عنوان یک تست بیوشیمیایی سریع و آسان برای کمک به شناسایی انتروکوک‌ها، استرپتوکوک‌های گروه D و برخی بی‌هوازی‌ها است. این تست می‌تواند بر روی شیب آگار در لوله انجام شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار) افتراقی برای تست آنزیم اسکولیناز (β-glucosidase)
• هدف کشت: تشخیص تولید آنزیم اسکولیناز و هیدرولیز اسکولین توسط باکتری‌ها
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های شیب‌دار یا پلیت ریخته و اتوکلاو می‌شود). محیط اولیه کهربایی روشن است.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره گوشت، اسکولین (Aesculin)، سیترات آمونیوم فریک (منبع آهن)، آگار.
• شرایط کشت: باکتری به صورت یک خط ضخیم (Streak) بر روی سطح شیب آگار در لوله یا به صورت یک نقطه (Spot) در مرکز پلیت کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۴۸ ساعت (معمولاً ۲۴ ساعت کافی است). برای بی‌هوازی‌ها، انکوباسیون در شرایط بی‌هوازی انجام می‌شود.
• خوانش نتیجه: مثبت (هیدرولیز اسکولین): سیاه شدن کل محیط (در لوله) یا تشکیل ناحیه سیاه-قهوه‌ای در اطراف و زیر ناحیه رشد باکتری (در پلیت). منفی: عدم تغییر رنگ؛ محیط به رنگ کهربایی اصلی خود باقی می‌ماند. ممکن است رشد باکتری مشاهده شود اما رنگ تغییر نمی‌کند.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Enterococcus faecalis ATCC 29212 (سیاه شدن محیط). سویه منفی: Streptococcus pyogenes ATCC 19615 (عدم سیاه شدن).
• کاربرد اصلی: تست افتراقی کلیدی در شناسایی انتروکوک‌ها و استرپتوکوک‌های گروه D، و نیز در شناسایی برخی گونه‌های بی‌هوازی در چارچوب سیستم‌های شناسایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Esculin Iron Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. آماده‌سازی شامل حل کردن و اتوکلاو است. محیط را می‌توان به صورت شیب‌های عمیق در لوله (برای مشاهده سیاه شدن کل محیط) یا در پلیت (برای مشاهده ناحیه سیاه اطراف کلنی) تهیه کرد. پلیت‌ها یا لوله‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، باید به دمای اتاق برسند. هنگام کشت در لوله شیب‌دار، اینوکولوم باید به صورت یک خط ضخیم بر روی سطح شیب کشیده شود. سیاه شدن باید در کل محیط (هم سطح و هم عمق) رخ دهد تا به عنوان مثبت قطعی در نظر گرفته شود. برخی از باکتری‌ها ممکن است به آرامی اسکولین را هیدرولیز کنند، بنابراین در صورت منفی بودن اولیه، ممکن است انکوباسیون تا ۷ روز ادامه یابد. این محیط گاهی همراه با صفرا (بایل) به عنوان صفرا-اسکولین آگار (Bile Esculin Agar) استفاده می‌شود که هم افتراقی و هم انتخابی است (صفرا بسیاری از باکتری‌های غیرانتروکوکی را مهار می‌کند). محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون استاندارد، نتایج واضح و قابل اعتمادی را برای این تست تشخیصی پرکاربرد فراهم می‌کند.