محیط کشت انتروکوکوسل آگار

محیط کشت انتخابی و افتراقی انتروکوکوسل آگار (Enterococcosel Agar)

محیط کشت Enterococcosel Agar یک محیط چندمنظوره است که انتخاب‌گری، افتراق و نشانگر رشد را در یک پلیت ترکیب می‌کند. پایه آن شامل پپتون، عصاره مخمر و نمک‌ها برای حمایت از رشد انتروکوک‌ها است. انتخاب‌گری از طریق افزودن آزید سدیم (که بسیاری از باکتری‌های گرم منفی را مهار می‌کند) و کانامایسین (که بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت به جز انتروکوک را مهار می‌نماید) حاصل می‌شود. جزء افتراقی کلیدی، اسکولین (Aesculin) و سیترات آهن است. انتروکوک‌ها (و برخی استرپتوکوک‌های گروه D) آنزیم اسکولیناز را تولید می‌کنند که اسکولین را هیدرولیز می‌کند. محصول هیدرولیز با آهن واکنش داده و یک کمپلکس سیاه-قهوه‌ای تشکیل می‌دهد که باعث سیاه شدن کلنی و اغلب محیط اطراف آن می‌شود. همچنین، آربوتین به عنوان یک کربوهیدرات اضافی وجود دارد که تخمیر آن توسط انتروکوک‌ها باعث زرد شدن بیشتر محیط در اطراف کلنی (به دلیل تولید اسید) می‌گردد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تشخیص پزشکی برای شناسایی انتروکوک‌ها از نمونه‌های مختلف، در کنترل کیفیت آب (به عنوان بخشی از روش استاندارد برای انتروکوک‌های مدفوعی) و در صنایع غذایی برای ردیابی این شاخص آلودگی مدفوعی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار) انتخابی و افتراقی برای انتروکوک‌ها
• هدف کشت: جداسازی، شناسایی و شمارش انتروکوک‌ها (عمدتاً Enterococcus faecalis و E. faecium) بر اساس هیدرولیز اسکولین و تخمیر آربوتین
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، اتوکلاو و سپس پس از خنک شدن، آنتی‌بیوتیک‌های انتخابی اضافه می‌شوند). محیط نهایی کهربایی است.
• ترکیبات کلیدی پایه و افتراقی: پپتون، عصاره مخمر، اسکولین، آربوتین، سیترات آهن (برای واکنش با اسکولین هیدرولیز شده)، آگار.
• ترکیبات کلیدی انتخابی: آزید سدیم، کانامایسین سولفات.
• شرایط کشت: روش فیلتراسیون ممبران برای آب (فیلتر روی محیط قرار می‌گیرد)، روش Spread Plate یا Pour Plate برای نمونه‌های دیگر.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. برای انتروکوک‌های مدفوعی در آب، انکوباسیون ممکن است ۴۸ ساعت باشد.
• خوانش نتیجه: انتروکوک مثبت: کلنی‌های کوچک (۱-۲ میلی‌متر)، خاکستری-سفید که توسط یک هاله یا ناحیه سیاه-قهوه‌ای (به دلیل هیدرولیز اسکولین) احاطه شده‌اند. کلنی و محیط اطراف ممکن است به رنگ زرد (تخمیر آربوتین) نیز درآید. منفی: عدم رشد یا رشد کلنی‌های بی‌رنگ بدون هاله سیاه.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تشکیل هاله سیاه مشخص با سویه Enterococcus faecalis ATCC 29212. عدم رشد یا عدم تشکیل هاله سیاه با سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923 (به دلیل کانامایسین) و سویه Escherichia coli ATCC 25922 (به دلیل آزید سدیم).
• کاربرد اصلی: روش استاندارد برای شمارش انتروکوک‌ها در آب با روش فیلتر ممبران (مطابق با استانداردهای APHA، ISO) و نیز شناسایی این باکتری در نمونه‌های بالینی و غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Enterococcosel Agar باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن به حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، محلول‌های استریل کانامایسین و آزید سدیم باید در شرایط آسپتیک اضافه شوند. آزید سدیم سمی است؛ هنگام کار باید احتیاط کرد. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. در روش فیلتر ممبران برای آب، فیلتر باید به خوبی روی سطح محیط قرار گیرد. همه سویه‌های انتروکوک اسکولین را هیدرولیز می‌کنند، اما برخی استرپتوکوک‌های گروه D غیرانتروکوکی (مانند Streptococcus bovis) نیز ممکن است مثبت باشند، اگرچه معمولاً توسط آنتی‌بیوتیک‌های انتخابی مهار می‌شوند. کلنی‌های مشکوک ممکن است برای تأیید نهایی با تست‌های اضافی (مانند تست CAT: تحمل نمک ۶.۵٪، رشد در ۴۵ درجه، تست PYR) بررسی شوند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون بهینه، انتخابی‌گری و افتراق عالی را برای این شاخص مهم باکتریایی فراهم می‌کند.