محیط کشت انتریک فرمنتیشن بیس

محیط کشت پایه تخمیر انتریک (Enteric Fermentation Base)

محیط کشت Enteric Fermentation Base یک محیط کمپلکس حداقلی است که حاوی پپتون، عصاره مخمر و نمک‌ها می‌باشد. این ترکیبات، نیتروژن، ویتامین‌ها، مواد معدنی و دیگر فاکتورهای رشد ضروری برای رشد باکتری‌های انتریک را فراهم می‌کنند، اما به طور عمدی فاقد هرگونه منبع کربوهیدرات قابل تخمیر هستند. این طراحی به کاربر اجازه می‌دهد تا یک قند یا الکل مشخص را به محیط اضافه کرده و توانایی یک باکتری خاص را برای تخمیر آن ماده به عنوان تنها منبع کربن آزمایش کند. برای تشخیص تخمیر، یک شناساگر pH (معمولاً قرمز فنل یا بروموکروزول پورپل) به محیط اضافه می‌شود. تخمیر موفقیت‌آمیز منجر به تولید اسید و کاهش pH می‌گردد که باعث تغییر رنگ شناساگر می‌شود. همچنین، یک لوله دورهام کوچک معکوس در لوله کشت قرار داده می‌شود تا تولید گاز (معمولاً CO₂ و H₂) را که محصول فرعی برخی فرآیندهای تخمیر است، آشکار سازد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی به عنوان بخشی از مجموعه تست‌های بیوشیمیایی استاندارد (مانند سری تست‌های تخمیر قند) برای شناسایی و افتراق باکتری‌های خانواده انتروباکتریاسه و سایر باکتری‌های گرم منفی بر اساس الگوی تخمیر کربوهیدرات‌های مختلف است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) پایه برای تست‌های تخمیر کربوهیدرات‌ها توسط باکتری‌های انتریک
• هدف کشت: بررسی توانایی باکتری در تخمیر یک کربوهیدرات یا الکل خاص با تولید اسید و گاز
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های حاوی لوله دورهام کوچک توزیع و اتوکلاو می‌شود). قبل از افزودن قند، محیط کهربایی رنگ است.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، سدیم کلرید، شناساگر pH (معمولاً قرمز فنل).
• افزودنی ضروری برای تست: یک قند، الکل یا گلیکوزید خاص (مانند گلوکز، لاکتوز، مانیتول، سوربیتول، اینوزیتول، ملوبیوز، رامنوز و غیره) که باید به صورت استریل به محیط پایه اضافه شود.
• شرایط کشت: لوله‌های حاوی محیط پایه و قند اضافه‌شده، با یک اینوکولوم سبک از کشت تازه باکتری (۱۸-۲۴ ساعته) تلقیح می‌شوند.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت (گاهی تا ۷ روز برای قندهای پیچیده یا باکتری‌های کند).
• خوانش نتیجه: تخمیر با تولید اسید: تغییر رنگ محیط از قرمز (خنثی-قلیایی) به زرد (اسیدی). تخمیر با تولید اسید و گاز: تغییر رنگ به زرد به همراه تشکیل حباب در لوله دورهام. عدم تخمیر (منفی): عدم تغییر رنگ (قرمز باقی می‌ماند) و عدم تولید گاز. ممکن است رشد باکتری (کدورت) بدون تغییر رنگ رخ دهد که نشانه استفاده از منابع نیتروژنی بدون تخمیر قند است.
• کنترل کیفیت: برای محیط حاوی گلوکز: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (زرد + گاز). سویه منفی: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (بدون تغییر رنگ یا قلیایی شدن).
• کاربرد اصلی: انجام تست‌های تخمیر قند به عنوان بخش ضروری از شناسایی بیوشیمیایی باکتری‌های انتروباکتریاسه و سایر باکتری‌های گرم منفی در چارچوب سیستم‌های شناسایی مانند API 20E.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Enteric Fermentation Base باید در جای خشک نگهداری شود. محیط پایه پس از اتوکلاو آماده است. قندهای مورد آزمایش باید به صورت جداگانه تهیه و استریل شوند (معمولاً با فیلتراسیون یا اتوکلاو در محلول ۱۰-۲۰٪) و سپس به مقدار مشخص (معمولاً ۰.۵-۱٪ حجمی/حجمی نهایی) به محیط پایه استریل و سرد شده اضافه گردند. از افزودن قند به محیط داغ خودداری کنید. لوله دورهام باید کاملاً پر از محیط بوده و حباب هوایی نداشته باشد. تغییر رنگ جزئی (نارنجی) ممکن است رخ دهد که معمولاً به عنوان منفی یا مثبت ضعیف تفسیر می‌شود؛ تغییر واضح به زرد معیار مثبت بودن است. محیط‌های حاوی قندهای مختلف باید برچسب‌گذاری دقیقی داشته باشند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با ترکیب پایه عاری از کربوهیدرات و یکنواخت، نتایج قابل اعتماد و قابل مقایسه‌ای را برای این تست‌های تشخیصی کلیدی فراهم می‌آورد.