محیط کشت بافر لیستریا انریچمنت براث بیس 2

محیط کشت پایه براث غنی‌کننده لیستریا بافر شده (Buffered Listeria Enrichment Broth Base)

محیط کشت Buffered Listeria Enrichment Broth Base که اغلب با نام اختصاری BLEB شناخته می‌شود، یک محیط غنی‌کننده انتخابی است که بر اساس فرمول Fraser توسعه یافته است. این محیط پایه حاوی ترکیبات مغذی مانند پپتون، عصاره مخمر و عصاره گوشت است که رشد لیستریا را پشتیبانی می‌کند. ویژگی کلیدی آن، وجود یک سیستم بافر فسفات قوی است که در برابر تغییرات pH ناشی از تخمیر قندهای موجود در نمونه غذایی (یا افزودن گلوکز) مقاومت کرده و pH محیط را در محدوده بهینه (حدود ۷.۲-۷.۴) حفظ می‌نماید. این امر از اسیدی شدن کشنده محیط جلوگیری کرده و به سلول‌های بالقوه آسیب‌دیده لیستریا اجازه احیا و تکثیر می‌دهد. خاصیت انتخابی اولیه با افزودن مکمل‌های آنتی‌بیوتیکی (معمولاً حاوی آکریفلاوین، نالیدیکسیک اسید و سیکلوهگزیمید) پس از استریل‌سازی محیط پایه، کامل می‌شود. این آنتی‌بیوتیک‌ها رشد فلور باکتریایی و قارچی رقیب را مهار می‌کنند.

این محیط مطابق با استانداردهای بین‌المللی (مانند ISO 11290 و FDA BAM) به عنوان مرحله اول غنی‌سازی در روش دو مرحله‌ای جداسازی لیستریا از مواد غذایی استفاده می‌شود. نمونه غذایی هموژنیزه شده به این براث تلقیح شده و پس از انکوباسیون اولیه، یک زیرکشت از آن به یک محیط غنی‌کننده ثانویه (مانند Fraser Broth) منتقل می‌گردد تا حساسیت تشخیص به حداکثر برسد. محیط کشت BLEB به ویژه برای نمونه‌های غذایی با بار میکروبی بالا یا حاوی مواد بازدارنده (مانند پنیر، گوشت‌های فرآوری شده) بسیار مناسب است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، پایه غنی‌کننده انتخابی (نیازمند افزودن مکمل آنتی‌بیوتیکی)
• هدف کشت: غنی‌سازی اولیه و بازیابی Listeria monocytogenes و سایر گونه‌های لیستریا از مواد غذایی
• حالت فیزیکی: پودر پایه (حل شونده در آب مقطر و اتوکلاو. سپس مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل اضافه می‌شود).
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، فسفات‌های بافری (دی‌پتاسیم فسفات و پتاسیم دی‌هیدروژن فسفات)، گلوکز، اسکولین، سدیم کلرید، منیزیم سولفات
• مکمل ضروری: مکمل آنتی‌بیوتیکی لیستریا (معمولاً حاوی آکریفلاوین HCl، نالیدیکسیک اسید و سیکلوهگزیمید).
• شرایط کشت: محیط در ظروف درب‌دار (بطری یا لوله) ریخته می‌شود. حجم نمونه غذایی معمولاً ۲۵ گرم در ۲۲۵ میلی‌لیتر محیط است.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۲۶ ساعت (برای مرحله اول غنی‌سازی).
• خوانش نتیجه (مرحله اول): رشد در این مرحله معمولاً به صورت کدورت کلی مشاهده می‌شود. لیستریا با زیرکشت به محیط غنی‌کننده ثانویه و سپس محیط جامد انتخابی شناسایی می‌شود. برخی پروتکل‌ها بر اساس سیاه شدن محیط (به دلیل هیدرولیز اسکولین) نتیجه را می‌خوانند، اما این ویژگی در مرحله اول چندان قابل اعتماد نیست.
• کنترل کیفیت: رشد و بازیابی موفق Listeria monocytogenes (ATCC 19115) از یک نمونه غذایی آلوده‌سازی شده (Spiked). مهار رشد باکتری‌های رقیب مانند Enterococcus faecalis.
• کاربرد اصلی: مرحله اول غنی‌سازی در روش استاندارد جداسازی Listeria monocytogenes از مواد غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Buffered Listeria Enrichment Broth Base باید در جای خشک نگهداری شود. دستور تهیه دقیق باید رعایت شود: پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن تا دمای اتاق یا ۳۰ درجه سانتی‌گراد، مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل (که معمولاً به صورت محلول یا لیوفیلیزه است) تحت شرایط استریل اضافه می‌شود. از گرم کردن مجدد محیط پس از افزودن آنتی‌بیوتیک خودداری کنید. محیط آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت کوتاه نگهداری کرد، اما استفاده فوری پس از آماده‌سازی توصیه می‌شود. نمونه غذایی باید بلافاصله پس از افزودن مکمل تلقیح شود. برای مخلوط کردن کامل نمونه و محیط، ظرف باید به خوبی تکان داده شود. در طول انکوباسیون، ظروف باید کاملاً درب‌بسته باشند. پس از ۲۴-۲۶ ساعت، یک لوپ از کشت به محیط غنی‌کننده ثانویه (معمولاً Fraser Broth) منتقل می‌شود. اگر محیط در مرحله اول به دلیل هیدرولیز اسکولین توسط لیستریا سیاه شود، یک نشانه مثبت اولیه است، اما عدم سیاه شدن به معنای منفی بودن نیست. تمام مراحل باید در شرایط استریل مناسب انجام شوند تا از آلودگی متقابل جلوگیری شود. پایداری آنتی‌بیوتیک‌ها (به ویژه آکریفلاوین که به نور حساس است) باید با نگهداری در تاریکی و دمای توصیه‌شوده حفظ گردد.