محیط کشت بافر پپتون واتر BPW 2

محیط کشت آب پپتون بافر شده (Buffered Peptone Water)

محیط کشت Buffered Peptone Water یک محیط ساده اما بسیار کارآمد است که حاوی پپتون به عنوان منبع نیتروژن و اسیدهای آمینه و یک سیستم بافر فسفات است. نقش کلیدی بافر، خنثی‌کردن اسیدهای طبیعی موجود در بسیاری از مواد غذایی و همچنین اسیدهای تولیدشده توسط تخمیر باکتریایی در هنگام انکوباسیون است. این کار از کاهش خطرناک pH که می‌تواند سلول‌های آسیب‌دیده یا استرس‌دیده پاتوژن‌ها (مانند سالمونلا) را از بین ببرد، جلوگیری می‌کند. محیط فاقد هرگونه ماده بازدارنده است، بنابراین امکان احیای فیزیولوژیکی و تکثیر اولیه طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌ها را فراهم می‌آورد.

کاربرد اصلی BPW در میکروبیولوژی غذایی، به عنوان محیط پیش‌غنی‌سازی اجباری در استانداردهای بین‌المللی (مانند ISO 6579 برای سالمونلا) است. نمونه غذایی (معمولاً ۲۵ گرم) در حجم مشخصی از BPW (معمولاً ۲۲۵ میلی‌لیتر) هموژنیزه شده و به مدت ۱۸-۲۴ ساعت انکوبه می‌شود. این مرحله به سلول‌های سالمونلا که ممکن است در اثر فرآیندهای غذایی، خشکی یا انجماد آسیب دیده باشند، اجازه می‌دهد تا خود را ترمیم کرده و تکثیر یابند. پس از این مرحله، یک Aliquot از کشت به محیط‌های غنی‌کننده انتخابی ثانویه (مانند Rappaport-Vassiliadis Soy Broth برای سالمونلا) انتقال می‌یابد. همچنین از BPW به عنوان محیط رقیق‌کننده عمومی در تهیه سوسپانسیون‌های باکتریایی نیز استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، غیرانتخابی/پیش‌غنی‌کننده (Pre-enrichment)
• هدف کشت: پیش‌غنی‌سازی نمونه‌های غذایی برای بازیابی سالمونلا و دیگر پاتوژن‌های روده‌ای آسیب‌دیده
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر و سپس استریل با اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، سدیم کلرید، دی‌پتاسیم فسفات، پتاسیم دی‌هیدروژن فسفات
• شرایط کشت: محیط در بطری‌ها یا ظروف استریل ریخته می‌شود. نمونه غذایی به آن اضافه و به خوبی مخلوط (هموژنیزه) می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت (گاهی تا ۴۸ ساعت برای برخی نمونه‌های خاص).
• خوانش نتیجه (پس از پیش‌غنی‌سازی): رشد در این مرحله معمولاً به صورت کدورت کلی (گاهی همراه با گاز یا رسوب) مشاهده می‌شود. حضور پاتوژن هدف با انتقال به محیط غنی‌کننده انتخابی و سپس محیط جامد تشخیص داده می‌شود.
• کنترل کیفیت: حمایت از رشد و احیای سلول‌های آسیب‌دیده Salmonella Typhimurium (ATCC 14028) که در معرض استرس حرارتی ملایم قرار گرفته‌اند. رشد خوب طیف وسیعی از باکتری‌ها.
• کاربرد اصلی: مرحله پیش‌غنی‌سازی اجباری در پروتکل‌های استاندارد جداسازی سالمونلا از مواد غذایی، و نیز پیش‌غنی‌سازی برای Listeria و E. coli در برخی روش‌ها.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Buffered Peptone Water باید در جای خشک نگهداری شود. تهیه محیط بسیار ساده است. نسبت نمونه به محیط (معمولاً ۱:۹، مثلاً ۲۵ گرم نمونه در ۲۲۵ میلی‌لیتر BPW) باید دقیقاً رعایت شود تا قدرت بافر حفظ گردد. هموژنیزاسیون نمونه باید به خوبی انجام شود (با استوماشر یا کیسه پلاستیکی استریل). زمان انکوباسیون نباید کمتر از ۱۸ ساعت باشد تا احیای سلول‌های آسیب‌دیده به طور کامل انجام شود. دمای انکوباسیون معمولاً ۳۷ درجه سانتی‌گراد است، اما برای برخی پاتوژن‌ها (مانند لیستریا) ممکن است ۳۰ درجه سانتی‌گراد توصیه شود. پس از انکوباسیون، زیرکشت باید بلافاصله به محیط غنی‌کننده انتخابی منتقل شود. محیط آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. اگر نمونه غذایی به خودی خود اسیدی باشد (مانند برخی میوه‌ها)، ممکن است نیاز به تنظیم pH نهایی مخلوط نمونه و BPW باشد. از آنجایی که محیط غیرانتخابی است، ممکن است فلور طبیعی غذایی به شدت رشد کند، اما این امر معمولاً مشکلی ایجاد نمی‌کند زیرا مرحله بعدی (غنی‌سازی انتخابی) این باکتری‌ها را مهار خواهد کرد. برای اطمینان از عملکرد خوب، استفاده از کنترل مثبت (نمونه غذایی آلوده‌سازی شده با پاتوژن هدف) توصیه می‌شود.