محیط کشت بافر گلیسرول سالین بیس 2

محیط پایه بافر سالین گلیسرول (Buffered Glycerol Saline Base)

محیط Buffered Glycerol Saline Base که با نام‌هایی مانند Sachs’ medium نیز شناخته می‌شود، یک محیط نگهدارنده انتخابی ملایم است. این محیط حاوی گلیسرول است که با ایجاد فشار اسمزی بالا، از تورم و لیز باکتری‌های گرم منفی حساس جلوگیری کرده و در عین حال به عنوان یک ماده محافظت‌کننده متابولیک عمل می‌کند. نمک (سدیم کلرید) نیز به فشار اسمزی کمک می‌کند. یک سیستم بافر فسفات (معمولاً دی‌پتاسیم فسفات و پتاسیم دی‌هیدروژن فسفات) pH محیط را در محدوده خنثی (حدود ۷.۰-۷.۴) ثابت نگه می‌دارد و از تغییرات کشنده pH ناشی از اسیدهای تولیدشده توسط باکتری‌های تخمیرکننده موجود در مدفوع جلوگیری می‌نماید. حالت نیمه‌جامد (به دلیل مقدار کم آگار) از حرکت فعال باکتری‌ها می‌کاهد.

کاربرد اصلی این محیط در جمع‌آوری و انتقال نمونه‌های مدفوع در بررسی‌های اپیدمیولوژیک بیماری‌های روده‌ای (مانند اسهال باکتریایی) در شرایطی است که کشت فوری امکان‌پذیر نیست. این محیط به طور ویژه برای حفظ قابلیت زنده‌مانی Salmonella و Shigella به مدت چند روز طراحی شده است، در حالی که از رشد بیش از حد فلور طبیعی تخمیرکننده (مانند E. coli) که ممکن است پاتوژن‌ها را تحت الشعاع قرار دهند، جلوگیری می‌کند. نمونه مدفوع مستقیماً در محیط مخلوط می‌شود و در دمای اتاق به آزمایشگاه منتقل می‌گردد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: نیمه‌جامد (Semi-solid)، انتقالی/نگهدارنده (Transport)
• هدف کشت: حفظ و انتقال نمونه‌های مدفوع برای جداسازی Salmonella و Shigella
• حالت فیزیکی: پودر پایه (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود، در لوله‌های پیچ‌دار توزیع و سپس اتوکلاو می‌شود). محیط در لوله به صورت ستونی جامد است.
• ترکیبات کلیدی: گلیسرول، سدیم کلرید، دی‌پتاسیم فسفات، پتاسیم دی‌هیدروژن فسفات، فنول رد (به عنوان شناساگر pH در برخی فرمولاسیون‌ها)، آگار (مقدار کم)
• شرایط کشت (تلقیح نمونه): نمونه مدفوع تازه (به اندازه یک نخود یا ۱-۲ گرم) مستقیماً در لوله محیط فرو برده و به خوبی مخلوط می‌شود تا یک سوسپانسیون یکنواخت حاصل شود.
• شرایط نگهداری و انتقال: لوله‌های تلقیح‌شده باید در دمای اتاق (۱۵-۲۵ درجه سانتی‌گراد) نگهداری و در اسرع وقت (ترجیحاً ظرف ۲۴-۷۲ ساعت) به آزمایشگاه منتقل شوند. از قرار دادن در یخچال خودداری شود.
• خوانش نتیجه (پس از انتقال): محیط به خودی خود برای تشخیص استفاده نمی‌شود. پس از انتقال به آزمایشگاه، یک لوپ از محیط (ترجیحاً از ناحیه ای که بیشترین رشد را نشان می‌دهد) بر روی محیط‌های انتخابی جامد (مانند SS Agar، XLD، MacConkey) کشت داده می‌شود.
• کنترل کیفیت: حفظ قابلیت زنده‌مانی و بازیابی Salmonella Typhimurium (ATCC 14028) و Shigella sonnei (ATCC 25931) پس از ۷۲ ساعت نگهداری در دمای اتاق. مهار نسبی رشد بیش ازحد Escherichia coli.
• کاربرد اصلی: جمع‌آوری و انتقال نمونه‌های مدفوع در بررسی‌های شیوع بیماری‌های روده‌ای، مطالعات میدانی و شرایطی که کشت فوری امکان‌پذیر نیست.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Buffered Glycerol Saline Base باید در جای خشک نگهداری شود. لوله‌های آماده محیط (قبل از تلقیح) را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند ماه نگهداری کرد. قبل از استفاده، لوله باید به دمای اتاق برسد. برای تلقیح، از نمونه مدفوع تازه (کمتر از ۲ ساعت از دفع) استفاده شود. اگر نمونه مدفوع آبکی است، می‌توان ۲-۳ قطره از آن را به لوله اضافه کرد. پس از تلقیح و مخلوط کردن، درب لوله محکم بسته شود. محیط نباید حاوی حباب هوا باشد. لوله‌های تلقیح‌شده باید برچسب‌گذاری شده و در یک ظرف محکم و ضد نشت برای انتقال بسته‌بندی شوند. از قرار دادن لوله‌ها در معرض نور مستقیم خورشید یا دمای بالا (بالای ۳۰ درجه سانتی‌گراد) خودداری شود. حداکثر زمان نگهداری توصیه شده قبل از کشت مجدد معمولاً ۷۲ ساعت است. پس از رسیدن به آزمایشگاه، کشت بر روی محیط انتخابی باید در اسرع وقت انجام گیرد. از آنجایی که این محیط برای مهار کامل فلور طبیعی طراحی نشده است، ممکن است برخی باکتری‌های غیرهدف نیز رشد کنند، بنابراین استفاده از محیط‌های انتخابی مناسب پس از انتقال ضروری است. محیط‌های استفاده شده باید به عنوان ضایعات میکروبیولوژیکی عفونی اتوکلاو شوند.