محیط کشت بایل اسکولین آزید آگار 2

محیط کشت آگار آزید اسکولین صفرا (Bile Esculin Azide Agar)

محیط کشت Bile Esculin Azide Agar یک اصلاح‌شده از محیط استاندارد Bile Esculin Agar است که با افزودن سدیم آزید خاصیت انتخابی آن به طور قابل توجهی افزایش یافته است. این محیط سه عامل انتخابی/تشخیصی را ترکیب می‌کند: ۱) نمک‌های صفراوی که باکتری‌های حساس به صفرا را مهار می‌کنند، ۲) سدیم آزید که به طور خاص با مهار سیتوکروم اکسیداز، رشد باکتری‌های گرم منفی و بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت هوازی را به شدت محدود می‌سازد و ۳) اسکولین به عنوان سوبسترای تشخیصی. انتروکوک‌ها که نسبت به هر سه عامل مقاوم هستند، می‌توانند رشد کنند و در صورت هیدرولیز اسکولین، باعث سیاه شدن محیط (به دلیل تشکیل کمپلکس آهن-اسکولتین) شوند.

این محیط به طور گسترده در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت آب برای جداسازی و شمارش انتروکوک‌ها به عنوان شاخص آلودگی مدفوعی (بر اساس استانداردهای معتبر مانند استاندارد متد) استفاده می‌شود. همچنین در میکروبیولوژی غذایی برای بررسی آلودگی برخی محصولات کاربرد دارد. خاصیت انتخابی بسیار قوی آن به دلیل وجود آزید، این محیط را برای نمونه‌هایی با فلور میکروبی پس‌زمینه بالا (مانند آب‌های سطحی، فاضلاب) ایده‌آل می‌سازد. کلونی‌های انتروکوک روی این محیط معمولاً کوچک و با مرکز سیاه (در صورت هیدرولیز سریع اسکولین) یا خاکستری-قهوه‌ای هستند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی بسیار قوی
• هدف کشت: جداسازی، شمارش و شناسایی اولیه انتروکوک‌ها (و استرپتوکوک‌های گروه D) از آب و مواد غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت تا حل شدن و سپس اتوکلاو).
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره گوشت، نمک‌های صفراوی (بایل)، اسکولین، سیترات فریک، سدیم آزید، آگار
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. نمونه آب (معمولاً از طریق فیلتراسیون ممبران) یا رقت‌های نمونه غذایی به صورت سطحی کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. شرایط هوازی یا میکروآئروفیلیک.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک انتروکوک: کوچک (۱-۲ میلی‌متر)، خاکستری، قهوه‌ای یا با مرکز سیاه (به دلیل هیدرولیز اسکولین). محیط اطراف کلونی ممکن است سیاه شده باشد. کلونی‌های غیرهدف معمولاً رشد نمی‌کنند یا بسیار کوچک و بدون سیاه شدن هستند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های Typical با سیاه شدن توسط Enterococcus faecalis (ATCC 29212). مهار کامل یا رشد بسیار ضعیف Escherichia coli (ATCC 25922) و Staphylococcus aureus (ATCC 25923).
• کاربرد اصلی: شمارش انتروکوک‌ها در آب‌های آشامیدنی، Recreational Water، و نمونه‌های غذایی با روش کشت سطحی یا فیلتراسیون.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت Bile Esculin Azide Agar حاوی سدیم آزید (ماده‌ای سمی) است و باید با احتیاط کامل و طبق پروتکل‌های ایمنی شیمیایی جابجا شود. محیط آماده شده را می‌توان در پلیت ریخته و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در کیسه‌های پلاستیکی بسته برای حداکثر دو هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. برای نمونه‌های آب، روش فیلتراسیون ممبران (با فیلتر ۰.۴۵ میکرومتر) متداول است، که فیلتر مستقیماً روی سطح آگار قرار می‌گیرد. برای نمونه‌های غذایی، از روش کشت سطحی رقت‌های متوالی استفاده می‌شود. از آنجایی که سدیم آزید ممکن است توسط برخی باکتری‌های گرم منفی در طول زمان تجزیه شود، انکوباسیون بیش از ۴۸ ساعت توصیه نمی‌شود. سیاه شدن ممکن است در اطراف کلونی یا در کل محیط زیر فیلتر رخ دهد. کلونی‌های مشکوک (سیاه‌شده) باید برای تأیید نهایی با تست‌های اضافی (مانند رشد در محیط حاوی ۶.۵٪ NaCl، تست کاتالاز) بررسی شوند. به دلیل سمیت آزید، پلیت‌های استفاده‌شده باید به عنوان ضایعات شیمیایی خطرناک دفع گردند. این محیط برای نمونه‌های بالینی حاوی انواع مختلف باکتری ممکن است انتخابی بودن شدیدی داشته باشد و بنابراین برای اهداف تشخیصی بالینی عمومی استفاده نمی‌شود.