محیط کشت بروسلا آگار 2

محیط کشت آگار بروسلا (Brucella Agar)

محیط کشت Brucella Agar یک محیط پایه غنی است که حاوی ترکیباتی مانند پپتون، عصاره مخمر، و عصاره گوشت است که نیازهای تغذیه‌ای پیچیده باکتری‌های بروسلا را تأمین می‌کند. این باکتری‌ها به دلیل رشد کند و نیازهای خاص، به محیط‌های بسیار مغذی نیاز دارند. فرمولاسیون این محیط اغلب با افزودن ویتامین‌ها (مانند ویتامین K1) و عصاره هم (Hemin) غنی‌تر می‌شود تا رشد بهینه بی‌هوازی‌ها نیز پشتیبانی شود. به منظور افزایش انتخابی بودن برای بروسلا، معمولاً آنتی‌بیوتیک‌هایی مانند پلی‌میکسین B، باسیتراسین، نالیدیکسیک اسید، ناتامایسین و وانکومایسین به صورت مکمل اضافه می‌شوند که محیط نهایی Brucella Selective Agar را تشکیل می‌دهد. این آنتی‌بیوتیک‌ها از رشد فلور طبیعی نمونه (به ویژه در کشت خون) جلوگیری می‌کنند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تخصصی میکروبیولوژی بالینی و دامپزشکی برای تشخیص بروسلوز است. نمونه‌هایی مانند خون، مغز استخوان، مایع مفصلی یا بافت‌های لنفاوی پس از دوره انکوباسیون طولانی (تا ۲۱ روز) در شرایط اتمسفر افزایش یافته دی‌اکسیدکربن (۵-۱۰٪ CO2) کشت داده می‌شوند. کلونی‌های بروسلا کوچک، صاف، براق، محدب و شفاف بوده و پس از چند روز تا چند هفته ظاهر می‌شوند. این محیط همچنین به عنوان یک محیط پایه عالی برای کشت بی‌هوازی‌های سخت‌پرور دیگر نیز کاربرد دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، غنی/انتخابی (با افزودن مکمل)
• هدف کشت: جداسازی و رشد باکتری‌های جنس Brucella و سایر بی‌هوازی‌های سخت‌پرور
• حالت فیزیکی: پودر پایه (تهیه شده در آب مقطر و اتوکلاو، سپس مکمل‌های استریل در صورت نیاز اضافه می‌شوند)
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، دکستروز، سدیم بیسولفیت، آگار
• مکمل‌های رایج: خون گوسفند (۵-۱۰٪)، ویتامین K1، عصاره هم (Hemin). برای محیط انتخابی: آنتی‌بیوتیک‌های ترکیبی (مانند Brucella Selective Supplement).
• شرایط کشت: محیط در پلیت یا بطری‌های ویژه ریخته می‌شود. نمونه خون (حجم بالا، ۱۰-۲۰ میلی‌لیتر) یا سایر نمونه‌ها کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد، در اتمسفر ۵-۱۰٪ دی‌اکسیدکربن (و اغلب مرطوب) به مدت طولانی (حداقل ۲۱ روز). پلیت‌ها باید هفته‌ای یک‌بار بررسی شوند.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک بروسلا: بسیار کوچک (۰.۵-۱ میلی‌متر پس از ۳-۵ روز)، صاف، براق، محدب، شفاف تا نیمه‌شفاف و به رنگ سفید مرواریدی. رشد کند است. کلونی‌های قدیمی‌تر ممکن است کدر و زبر شوند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب با سویه استاندارد مانند Brucella abortus (در شرایط ایمنی زیستی سطح ۳). مهار فلور طبیعی با افزودن مکمل انتخابی.
• کاربرد اصلی: تشخیص میکروبیولوژیکی بروسلوز در انسان و دام، و کشت بی‌هوازی‌های سخت‌پرور.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Brucella Agar باید در جای خشک نگهداری شود. به دلیل نیاز به انکوباسیون طولانی، استریلیته کامل محیط و ظروف ضروری است. پس از اتوکلاو محیط پایه و خنک شدن تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، مکمل‌های استریل (خون، ویتامین‌ها، آنتی‌بیوتیک) اضافه می‌شوند. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در کیسه‌های پلاستیکی برای حداکثر دو هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. برای کشت خون، از سیستم بطری کشت خون مخصوص یا کشت مستقیم روی پلیت استفاده می‌شود. تمام مراحل کار با نمونه‌های مشکوک به بروسلا باید با رعایت دقیق ایمنی زیستی سطح ۳ (در هود کلاس II یا III و با پوشش محافظ کامل) انجام شود، زیرا این باکتری قابلیت انتقال هوازی و بیماری‌زایی بالا دارد. بررسی روزانه پلیت‌ها در هفته اول و سپس هفته‌ای یک‌بار لازم است. کلونی‌های مشکوک باید برای تأیید با تست‌های بیوشیمیایی (اکسیداز، اورهاز، حساسیت به رنگ‌های اختصاصی) و روش‌های سرولوژیکی یا مولکولی بررسی شوند. پلیت‌های کشت شده باید پس از پایان کار به طور کامل اتوکلاو شوند.