محیط کشت بروسلا براث 2

محیط کشت براث بروسلا (Brucella Broth)

محیط کشت Brucella Broth فرم مایع محیط جامد Brucella Agar است و برای کشت مایع، غنی‌سازی و تولید زیست‌توده (بیومس) باکتری‌های بروسلا طراحی شده است. این محیط حاوی ترکیبات مغذی پیچیده‌ای مانند پپتون، عصاره مخمر و عصاره گوشت است که نیازهای متابولیک خاص و فاکتورهای رشد ضروری برای این باکتری‌های کندرشد و سخت‌پرور را فراهم می‌آورد. برای بهبود بیشتر رشد، اغلب ویتامین K1 و عصاره هم (Hemin) به عنوان مکمل اضافه می‌شوند. دکستروز موجود در محیط نیز به عنوان یک منبع کربن قابل تخمیر، انرژی اولیه را تأمین می‌کند. برای اهداف انتخابی، می‌توان آنتی‌بیوتیک‌های مشابه محیط جامد (پلی‌میکسین B، نالیدیکسیک اسید، وانکومایسین و…) را به آن افزود.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تخصصی تشخیصی و تحقیقاتی برای غنی‌سازی نمونه‌های بالینی (مانند خون، مایع مغزی-نخاعی) مشکوک به بروسلوز، قبل از کشت بر روی محیط جامد است. همچنین از آن برای تهیه اینوکولوم (کشت آغازگر) با تراکم بالا جهت انجام تست‌های حساسیت آنتی‌بیوتیکی، مطالعات سرولوژیکی (تهیه آنتی‌ژن) و تحقیقات فیزیولوژیکی بر روی بروسلا استفاده می‌شود. علاوه بر این، Brucella Broth به دلیل غنای بالا، یک محیط پایه محبوب برای کشت انواع مختلف بی‌هوازی‌ها در مطالعات میکروبیولوژی بی‌هوازی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، غنی/انتخابی (با افزودن مکمل)
• هدف کشت: رشد و تکثیر باکتری‌های جنس Brucella در فاز مایع و کشت بی‌هوازی‌های سخت‌پرور
• حالت فیزیکی: پودر پایه (حل شونده در آب مقطر و سپس اتوکلاو. مکمل‌های استریل پس از سرد شدن اضافه می‌شوند)
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، دکستروز، سدیم کلرید، سدیم بیسولفیت
• مکمل‌های رایج: ویتامین K1، عصاره هم (Hemin). برای محیط انتخابی: آنتی‌بیوتیک‌های ترکیبی (Brucella Selective Supplement). گاهی خون (۵-۱۰٪) نیز اضافه می‌شود.
• شرایط کشت: محیط در بطری‌ها، ویال‌ها یا فلاسک‌های درب‌دار مناسب ریخته می‌شود. حجم نمونه خون برای غنی‌سازی معمولاً نسبت ۱:۱۰ (خون به محیط) است.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد، در اتمسفر ۵-۱۰٪ دی‌اکسیدکربن (برای بروسلا) یا شرایط بی‌هوازی کامل (برای بی‌هوازی‌های دیگر) به مدت چند روز تا چند هفته (بسته به هدف). کشت می‌تواند ایستا یا همراه با تکان ملایم باشد.
• خوانش نتیجه: رشد به صورت کدورت (Turbidity) ظریف و پیشرونده، گاهی همراه با تشکیل رسوب یا فلک (Flocculent growth) قابل مشاهده است. برای بروسلا، کدورت ممکن است حتی پس از ۷-۱۰ روز نیز بسیار ملایم باشد.
• کنترل کیفیت: رشد قابل تشخیص و ایجاد کدورت توسط سویه استاندارد Brucella abortus (در شرایط ایمنی سطح ۳) یا رشد خوب بی‌هوازی‌های شاهد مانند Bacteroides fragilis.
• کاربرد اصلی: غنی‌سازی نمونه‌های بالینی برای بروسلا، تولید زیست‌توده برای تحقیقات، و محیط پایه کشت مایع برای بی‌هوازی‌ها.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Brucella Broth باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه، آن را به سرعت تا دمای اتاق یا ۳۷ درجه سانتی‌گراد خنک کرده و سپس مکمل‌های استریل (ویتامین K1، همین و آنتی‌بیوتیک‌ها در صورت نیاز) را اضافه کنید. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای مدت کوتاه نگهداری کرد. برای کشت بروسلا، بهتر است از ظروف با سطح مایع نسبتاً کم (نسبت به حجم ظرف) استفاده شود تا تبادل گاز CO2 تسهیل گردد. تلقیح نمونه خون باید بلافاصله پس از جمع‌آوری انجام شود. برای غنی‌سازی، انکوباسیون طولانی‌مدت (تا ۴ هفته) با بررسی منظم کدورت ممکن است لازم باشد. حتی در صورت عدم مشاهده کدورت واضح، زیرکشت بر روی محیط جامد انتخابی پس از یک هفته توصیه می‌شود. تمام مراحل کار با کشت احتمالی بروسلا باید با رعایت شدید ایمنی زیستی سطح ۳ (در هود ایمنی مناسب و با پوشش محافظ کامل) انجام شود. کشت‌های مایع بروسلا به دلیل تولید آئروسل، خطرناک‌تر هستند. پس از اتمام کار، تمام مواد باید اتوکلاو شوند. برای کشت بی‌هوازی‌های معمولی، محیط را می‌توان با تکنیک‌های استاندارد بی‌هوازی (استفاده از چمبر، کیسه گاز یا سیستم رول‌تیوب) انکوبه کرد.