محیط کشت بروموکرزول پرپل آزید براث 2

محیط کشت براث آزید بروموکروزول پرپل (Bromocresol Purple Azide Broth)

محیط کشت Bromocresol Purple Azide Broth یک محیط انتخابی بر پایه گلوکز است که با افزودن سدیم آزید به عنوان یک مهارکننده قوی تنفس، به طور انتخابی از رشد بیشتر باکتری‌های گرم منفی و بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت جلوگیری می‌کند. استرپتوکوک‌های مدفوعی (انتروکوک‌ها) به دلیل نداشتن سیتوکروم اکسیداز، نسبت به آزید مقاوم هستند و می‌توانند در حضور آن رشد کنند. گلوکز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات تخمیرپذیر در محیط موجود است. شناساگر بروموکروزول پرپل تغییرات pH را نشان می‌دهد: در pH خنثی یا قلیایی بنفش/ارغوانی و در pH اسیدی زرد. انتروکوک‌ها با تخمیر گلوکز، اسید تولید کرده و رنگ محیط را از بنفش به زرد تغییر می‌دهند. تولید اسید (زرد شدن) همراه با کدورت، نشانه مثبت فرضی برای حضور استرپتوکوک‌های مدفوعی است.

این محیط عمدتاً در آزمایشگاه‌های آب و فاضلاب به عنوان بخشی از روش تخمیر لوله‌ای چندگانه (MPN) برای شناسایی و شمارش انتروکوک‌ها به عنوان شاخص آلودگی مدفوعی استفاده می‌شود. این آزمون معمولاً پس از مرحله غنی‌سازی اولیه در محیطی مانند Azide Dextrose Broth انجام می‌گیرد و به عنوان تست تأییدی برای انتروکوک‌ها محسوب می‌شود. محیط کشت Bromocresol Purple Azide Broth به دلیل انتخابی بودن بالا، برای نمونه‌های دارای فلور پس‌زمینه زیاد مناسب است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی-تشخیصی (برای تست تأییدی در روش MPN)
• هدف کشت: تأیید حضور استرپتوکوک‌های مدفوعی (انتروکوک‌ها) در آب بر اساس تخمیر گلوکز و مقاومت به آزید
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر، سپس در لوله‌ها توزیع و اتوکلاو می‌شود)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، گلوکز، سدیم آزید، شناساگر بروموکروزول پرپل
• شرایط کشت: محیط در لوله‌های کشت (بدون لوله دورهام) ریخته و استریل می‌شود. یک لوپ از کشت مثبت فرضی از مرحله قبل (مانند Azide Dextrose Broth) به این محیط تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: مثبت (تأییدی): تغییر رنگ محیط از بنفش/ارغوانی به زرد (تولید اسید) همراه با کدورت قابل مشاهده. منفی: عدم تغییر رنگ (محیط بنفش باقی می‌ماند) یا تغییر رنگ بدون کدورت (ممکن است ناشی از باقی‌مانده اسید از مرحله قبل باشد).
• کنترل کیفیت: مثبت: Enterococcus faecalis (ATCC 29212) – تغییر رنگ به زرد در ۲۴ ساعت. منفی: Escherichia coli (ATCC 25922) – عدم رشد یا عدم تغییر رنگ.
• کاربرد اصلی: تست تأییدی در روش تخمیر لوله‌ای چندگانه (MPN) برای انتروکوک‌ها در استانداردهای بررسی کیفیت میکروبیولوژیکی آب.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Bromocresol Purple Azide Broth حاوی سدیم آزید سمی است و باید با احتیاط کامل و طبق دستورالعمل ایمنی شیمیایی جابجا شود. محیط آماده در لوله‌ها را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از تلقیح، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. برای تلقیح، از کشت مثبت فرضی مرحله قبل (که نشان‌دهنده تولید گاز در Azide Dextrose Broth بوده) استفاده می‌شود. پس از تلقیح، لوله‌ها به آرامی مخلوط می‌شوند. تفسیر نتایج باید در ۲۴ و ۴۸ ساعت انجام گیرد. تغییر رنگ به زرد باید واضح و همراه با کدورت باشد. اگر تغییر رنگ رخ دهد اما کدورتی مشاهده نشود، ممکن است ناشی از اسید باقی‌مانده از مرحله غنی‌سازی باشد و باید منفی در نظر گرفته شود. لوله‌های مثبت تأییدی را می‌توان برای تأیید نهایی بر روی محیط جامد انتخابی (مانند Slanetz and Bartley Agar) کشت داد. تمام ضایعات حاوی این محیط باید به عنوان ضایعات شیمیایی خطرناک (به دلیل وجود آزید) دفع شوند. این محیط به طور خاص برای انتروکوک‌ها طراحی شده است و برای سایر استرپتوکوک‌ها ممکن است نتیجه مثبت ندهد. به دلیل سمیت آزید، از تنفس بخارات آن اجتناب کرده و از دستکش استفاده کنید.