محیط کشت بریلیانت گرین بایل براث ۲% 2

محیط کشت براث برلیانت گرین صفرا لاکتوز (BRILA Broth)

محیط کشت Brilliant Green Bile Broth 2% که به نام‌های BRILA Broth یا BGBB نیز شناخته می‌شود، یک محیط انتخابی بر پایه لاکتوز است. خاصیت انتخابی شدید آن ناشی از وجود همزمان برلیانت گرین (یک رنگ بازدارنده) و نمک‌های صفراوی (بایل) در غلظت ۲٪ است که به طور موثری رشد باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از باکتری‌های گرم منفی غیرتخمیرکننده لاکتوز را مهار می‌کند. لاکتوز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات در محیط وجود دارد. باکتری‌های کلی‌فرم (مانند E. coli، Klebsiella، Enterobacter) که بتوانند لاکتوز را تخمیر کنند، ابتدا اسید و سپس گاز تولید می‌نمایند. تولید گاز در لوله دورهام (Durham tube) قرارگرفته در لوله محیط، به عنوان یک نتیجه تخمیر فرضی مثبت برای کلی‌فرم‌ها تعبیر می‌شود.

این محیط به طور گسترده در روش‌های استاندارد قدیمی برای بررسی کیفیت میکروبیولوژیکی آب (هم به عنوان تست فرضی و هم تست تأییدی در روش Multiple Tube Fermentation یا MPN) و نیز در بررسی شیر و فرآورده‌های لبنی استفاده می‌شده است. تولید گاز در این محیط، همراه با ویژگی‌های مورفولوژیک در محیط‌های جامد تأییدی، شواهد قوی از حضور کلی‌فرم‌ها و احتمالاً E. coli (به عنوان شاخص آلودگی مدفوعی) ارائه می‌دهد. به دلیل انتخابی بودن بالا، برای نمونه‌های با فلور میکروبی پیچیده (مانند آب‌های سطحی) مناسب است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی (برای تست تخمیر فرضی و تأییدی در روش MPN)
• هدف کشت: تشخیص و تأیید حضور کلی‌فرم‌ها و E. coli در آب و مواد غذایی بر اساس تخمیر لاکتوز و تولید گاز
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر و سپس در لوله‌های حاوی لوله دورهام توزیع و اتوکلاو می‌شود)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، لاکتوز، نمک‌های صفراوی (به غلظت ۲٪)، برلیانت گرین
• شرایط کشت: محیط در لوله‌های تخمیر حاوی لوله دورهام (Durham tube) کوچک وارونه ریخته و استریل می‌شود. نمونه آب یا رقت غذایی به لوله تلقیح می‌گردد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. مشاهده اولیه در ۲۴ ساعت و مشاهده نهایی در ۴۸ ساعت انجام می‌شود.
• خوانش نتیجه: مثبت (فرضی یا تأییدی): تولید هر مقدار گاز در لوله دورهام (حباب جمع‌شده) همراه با کدورت در محیط. منفی: عدم تولید گاز (حتی در صورت وجود کدورت).
• کنترل کیفیت: مثبت: Escherichia coli (ATCC 25922) – تولید گاز قابل توجه در ۲۴ ساعت. منفی: Enterococcus faecalis (ATCC 29212) – عدم رشد یا عدم تولید گاز.
• کاربرد اصلی: تست تأییدی در روش تخمیر لوله‌ای چندگانه (MPN) برای کلی‌فرم‌ها و E. coli در استانداردهای قدیمی‌تر بررسی آب و فاضلاب (مانند استاندارد متد) و کنترل کیفیت لبنیات.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Brilliant Green Bile Broth 2% باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. لوله‌های آماده حاوی لوله دورهام باید قبل از استفاده بررسی شوند تا فاقد حباب هوا باشند. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از تلقیح، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. حجم نمونه تلقیحی بر اساس روش MPN (مثلاً سری‌های ۱۰ میلی‌لیتری، ۱ میلی‌لیتری و ۰.۱ میلی‌لیتری) تعیین می‌شود. پس از تلقیح، لوله‌ها باید به آرامی مخلوط شوند تا هوا وارد لوله دورهام نشود. تفسیر نتایج باید در ۲۴ و ۴۸ ساعت انجام گیرد. تولید گاز (حتی یک حباب کوچک) در لوله دورهام به عنوان مثبت گزارش می‌شود. گاهی اوقات باکتری‌های غیرکلی‌فرم نیز ممکن است در این محیط رشد کرده و گاز تولید کنند (مثبت کاذب)، بنابراین ممکن است نیاز به تأیید بیشتر روی محیط جامد انتخابی (مانند EMB Agar) باشد. به دلیل غلظت بالای نمک صفراوی (۲٪)، این محیط برای برخی از کلی‌فرم‌های حساس ممکن است بسیار بازدارنده باشد. این محیط امروزه در بسیاری از پروتکل‌های استاندارد ممکن است با محیط‌های انتخابی‌تر و سریع‌تر جایگزین شده باشد، اما هنوز در برخی آزمایشگاه‌ها و برای اهداف خاص مورد استفاده قرار می‌گیرد.