محیط کشت دمی فراسر براث

محیط کشت غنی‌سازی نیمه فریزر (Demi Fraser/Half Fraser Broth)

محیط کشت Demi Fraser Broth یک محیط غنی‌سازی مایع بر پایه تریپتون و عصاره مخمر است که حاوی نمک‌های فسفات به عنوان بافر، و ترکیبات انتخابی با غلظت نصف نسبت به محیط Fraser Broth کامل می‌باشد. این ترکیبات شامل لیتیم کلراید، اسفودالیم (مهارکننده باکتری‌های گرم مثبت) و نانوالیدیک اسید (مهارکننده باکتری‌های گرم منفی) هستند. غلظت پایین‌تر این مهارکننده‌ها، استرس وارده بر سلول‌های بالقوه آسیب‌دیده لیستریا (مثلاً در اثر فرآیندهای غذایی یا انجماد) را کاهش داده و امکان بازسازی (Resuscitation) و تکثیر اولیه جمعیت باکتری را قبل از انتقال به مرحله غنی‌سازی انتخابی قوی‌تر (Fraser Broth کامل) فراهم می‌کند. این مرحله دو‌مرحله‌ای، حساسیت روش تشخیص را به طور قابل توجهی افزایش می‌دهد.

کاربرد اصلی این محیط منحصراً در روش استاندارد ISO 11290-1 برای جداسازی و شمارش لیستریا مونوسیتوژنز و دیگر گونه‌های لیستریا از محصولات غذایی (به ویژه گوشت، ماهی، لبنیات، سبزیجات آماده مصرف) و سطوح محیطی کارخانه‌های تولید غذا است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) غنی‌سازی انتخابی برای مرحله پیش‌غنی‌سازی (Pre-enrichment)
• هدف کشت: بازسازی و تکثیر اولیه سلول‌های لیستریا (به ویژه Listeria monocytogenes) آسیب‌دیده و تحت استرس، قبل از غنی‌سازی انتخابی نهایی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس اتوکلاو می‌شود). محیط مودی نسبتاً شفاف است.
• ترکیبات کلیدی تغذیه‌ای: تریپتون پپتون، عصاره مخمر، فسفات‌های سدیم و پتاسیم (بافر).
• ترکیبات کلیدی انتخابی (با غلظت نصف): لیتیم کلراید (افزایش تحمل به نمک و مهار برخی فلورها)، اسفودالیم (Aesculin) (برای افتراق بر اساس هیدرولیز)، نانوالیدیک اسید (مهارگر گرم منفی‌ها).
• شرایط کشت: نمونه غذایی (معمولاً ۲۵ گرم) مستقیماً به یک بطری حاوی ۲۲۵ میلی‌لیتر از محیط استریل اضافه و به خوبی هم‌زده می‌شود (رقت ۱:۱۰).
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ ساعت (± ۲ ساعت).
• خوانش نتیجه (پس از ۲۴ ساعت): محیط ممکن است به دلیل هیدرولیز اسفودالین توسط لیستریا (و برخی انتروکوک‌ها) کمی تیره (قهوه‌ای-سیاه) شود، اما این تغییر قطعی نیست. نتیجه اصلی رشد در این مرحله نیست، بلکه ادامه فرآیند است: پس از ۲۴ ساعت، ۰.۱ میلی‌لیتر از کشت به ۱۰ میلی‌لیتر از محیط Fraser Broth کامل (Secondary Enrichment) منتقل می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و بازسازی سویه Listeria monocytogenes ATCC 7644 که به طور مصنوعی تحت استرس قرار گرفته است. مهار نسبی سویه‌های رقابتی مانند Escherichia coli.
• کاربرد اصلی: مرحله اول (پیش‌غنی‌سازی) در روش استاندارد دو مرحله‌ای ISO برای تشخیص Listeria monocytogenes در مواد غذایی و محیط.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Demi Fraser Broth باید در جای خشک نگهداری شود. آماده‌سازی دقیق با استفاده از آب مقطر و رعایت غلظت توصیه‌شده بسیار مهم است. پس از اتوکلاو، محیط را در دمای اتاق خنک کنید. این محیط فقط برای مرحله پیش‌غنی‌سازی ۲۴ ساعته استفاده می‌شود و نباید به عنوان محیط غنی‌سازی نهایی مورد استفاده قرار گیرد. انتقال به موقع (پس از ۲۴ ساعت) به محیط Fraser Broth کامل برای موفقیت روش ضروری است. نمونه‌های غذایی با pH پایین یا محتوای نمک بالا ممکن است نیاز به تنظیم pH قبل از افزودن به محیط داشته باشند. محصول با کیفیت بالا از ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون مطابق با استاندارد ISO، عملکرد قابل اعتماد و تکرارپذیری لازم برای این مرحله حساس از تشخیص لیستریا را تضمین می‌کند. تمام مراحل کار با نمونه‌های غذایی مشکوک باید تحت شرایط ایمنی زیستی مناسب انجام شود.