محیط کشت دکربوکسیلاز براث بیس مولر

محیط کشت پایه دکربوکسیلاز مولر (Decarboxylase Broth Base Moeller)

محیط کشت Decarboxylase Broth Base (Moeller) یک محیط پایه کم‌مصرف (Low Peptone) است که حاوی عصاره مخمر، گلوکز و شناساگر رنگ بنفش کریزول رد (Cresol Red) می‌باشد. این محیط به خودی خود برای انجام تست استفاده نمی‌شود، بلکه به عنوان پایه‌ای برای تهیه سه محیط نهایی مختلف با افزودن اسیدهای آمینه L-لیزین، L-آرژینین و L-اورنیتین (معمولاً به صورت دی‌هیدروکلرید) عمل می‌کند. اصل تست بر اساس توانایی برخی باکتری‌ها در تولید آنزیم‌های دکربوکسیلاز است که گروه کربوکسیل (-COOH) را از این اسیدهای آمینه حذف کرده و آمین‌های اولیه قلیایی (کاداورین، آگرماتین، پوترسین) تولید می‌کنند. این واکنش باعث قلیایی شدن محیط و تغییر رنگ شناساگر از زرد (اسیدی) به بنفش/ارغوانی (قلیایی) می‌گردد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی برای شناسایی و تمایز اعضای خانواده انتروباکتریاسه (مانند سالمونلا، شیگلا، کلبسیلا، انتروباکتر و …) و نیز برخی باکتری‌های غیرتخمیرکننده گرم منفی (مانند سودوموناس) بر اساس الگوی فعالیت دکربوکسیلازی آن‌ها است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) پایه برای تست‌های بیوشیمیایی آنزیمی (دکربوکسیلاز/دهیدروکسیلاز)
• هدف کشت: بررسی توانایی باکتری در تولید آنزیم‌های دکربوکسیلاز برای اسیدهای آمینه لیزین، آرژینین و اورنیتین به منظور کمک به شناسایی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس به لوله‌ها تقسیم و استریل می‌شود). پس از افزودن اسید آمینه، محیط مایع و شفاف است.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون (مقدار کم)، عصاره مخمر، گلوکز (منبع تخمیر)، بنفش کریزول رد (شناساگر pH)، پیریدوکسال (کوفاکتور آنزیمی).
• مواد افزودنی ضروری برای تست: اسیدهای آمینه L-لیزین، L-آرژینین و L-اورنیتین باید جداگانه و به غلظت نهایی ۱٪ به محیط پایه اضافه شوند. یک لوله کنترل نیز فقط حاوی محیط پایه (بدون اسید آمینه اضافه) نگهداری می‌شود.
• شرایط کشت: لوله‌های حاوی ۳-۵ میلی‌لیتر از محیط نهایی، با یک اینوکولوم سبک از کشت تازه باکتری (۱۸-۲۴ ساعته) تلقیح می‌شوند. بلافاصله پس از تلقیح، لوله‌ها با یک لایه حدود ۱۰ میلی‌متری از روغن معدنی استریل پوشانده می‌شوند تا شرایط بی‌هوازی (تنفس تخمیری) ایجاد شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت، اما خوانش نهایی ممکن است تا ۴ روز ادامه یابد (به ویژه برای باکتری‌های کند رشد).
• خوانش نتیجه: مثبت (تولید دکربوکسیلاز): تغییر رنگ محیط از زرد (به دلیل تخمیر گلوکز و تولید اسید در ابتدا) به بنفش/ارغوانی (به دلیل تولید آمین قلیایی). منفی: محیط زرد باقی می‌ماند (عدم تولید آمین). لوله کنترل (بدون اسید آمینه) باید زرد باقی بماند (تأیید تخمیر گلوکز). اگر کنترل بنفش شود، تست نامعتبر است.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت برای لیزین دکربوکسیلاز: Enterobacter cloacae ATCC 23355 (بنفش). سویه منفی: Shigella flexneri ATCC 12022 (زرد). کنترل تخمیر: همه لوله‌ها ابتدا باید زرد شوند.
• کاربرد اصلی: شناسایی بیوشیمیایی اعضای خانواده انتروباکتریاسه و سایر باکتری‌ها در چارچوب سیستم‌های شناسایی مانند API 20E یا به عنوان تست تکمیلی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Decarboxylase Broth Base (Moeller) باید در جای خشک نگهداری شود. پس از تهیه محیط پایه و توزیع در لوله‌ها، استریل‌سازی با اتوکلاو انجام می‌شود. اسیدهای آمینه باید به صورت جداگانه در آب مقطر حل شده و با فیلتراسیون استریل شوند، سپس به نسبت صحیح به محیط پایه استریل و سرد شده اضافه گردند. پوشاندن لوله‌ها با روغن معدنی استریل بلافاصله پس از تلقیح یک مرحله حیاتی برای ایجاد شرایط بی‌هوازی و جلوگیری از اکسیداسیون آمین‌های تولیدی است. خوانش رنگ باید در برابر یک زمینه سفید انجام شود. تغییر رنگ جزئی یا فقط در سطح ممکن است به عنوان مثبت ضعیف در نظر گرفته شود. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری کرد. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با ترکیب دقیق و حساس، نتایج واضح و قابل اعتمادی برای این تست کلیدی بیوشیمیایی فراهم می‌کند.