محیط کشت سودوموناس آگار P 1

محیط کشت آگار پی سودوموناس برای پیوسیانین (Pseudomonas Agar P)

محیط کشت Pseudomonas Agar P که معروف به King A Medium است، یک محیط اختصاصی و بهینه‌شده برای مطالعه و تشدید تولید رنگدانه‌های باکتریایی، به ویژه پیوسیانین و در درجه دوم پیوریدین (فلورسین)، توسط سودوموناس آئروژینوزا می‌باشد. فرمولاسیون این محیط حاوی مقادیر بالای گلیسرول و پپتون است که به عنوان پیش‌ساز و منبع کربن برای مسیرهای بیوسنتزی این رنگدانه‌ها عمل می‌کنند. همچنین، حضور سولفات منیزیم و سیترات پتاسیم به عنوان کوفاکتورهای آنزیمی ضروری، تولید رنگدانه را تحریک می‌کند. بر خلاف محیط‌های انتخابی مانند CN Agar، محیط King A یک محیط غیرانتخابی است و هدف آن مهار سایر میکروارگانیسم‌ها نیست، بلکه ایجاد شرایط ایده‌آل برای بیان بیشینه رنگدانه در سویه‌های تولیدکننده است. از این رو، معمولاً پس از جداسازی اولیه باکتری، برای شناسایی نهایی و مطالعات فنوتیپی از این محیط استفاده می‌شود.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی تشخیصی بالینی برای کمک به شناسایی سودوموناس آئروژینوزا بر اساس تولید رنگدانه مشخصه، و نیز در تحقیقات میکروبیولوژی برای مطالعه ژنتیک و تنظیم تولید این عوامل ویرولانس است. تولید شدید رنگدانه آبی-سبز پیوسیانین که به داخل محیط انتشار می‌یابد، یک ویژگی تشخیصی کلیدی است. برخی سویه‌ها ممکن است رنگدانه فلورسنت پیوریدین (زرد-سبز) نیز تولید کنند که تحت نور UV قابل مشاهده است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، غنی و اختصاصی برای تولید رنگدانه، غیرانتخابی.
• هدف کشت: تشدید و مشاهده تولید رنگدانه‌های پیوسیانین و پیوریدین توسط سودوموناس آئروژینوزا و برخی سودوموناس‌های دیگر برای اهداف تشخیصی و تحقیقاتی.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو).
• ترکیبات کلیدی محرک تولید رنگدانه: گلیسرول (منبع کربن غنی)، پپتون (تامین کننده اسیدهای آمینه پیش‌ساز)، سولفات منیزیم (کوآنزیم)، سیترات پتاسیم (تنظیم کننده متابولیک)، آگار.
• مکانیسم عمل: فراهم آوری پیش‌سازها و کوفاکتورهای ضروری برای مسیرهای بیوسنتزی پیوسیانین (از اسید آمینه تریپتوفان) و پیوریدین.
• شرایط کشت: کشت خطی یا نقطتی از کلونی‌های خالص شده.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ ساعت، و ادامه تا ۴۸-۷۲ ساعت برای مشاهده تولید کامل رنگدانه. مشاهده در نور معمولی و نور UV (۳۶۵ نانومتر) برای تشخیص فلورسانس پیوریدین.
• خوانش نتیجه: مثبت برای پیوسیانین: تولید رنگدانه آبی-سبز (آبی نیلی) قابل مشاهده در کلونی و انتشار آن به محیط اطراف. مثبت برای پیوریدین: مشاهده فلورسانس سبز-زرد درخشان تحت نور UV. منفی: عدم تولید رنگدانه یا تنها تولید رنگدانه‌های دیگر (مثلاً پیوروبرین یا پیوملانین که قهوه‌ای/سیاه هستند).
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تولید رنگدانه آبی-سبز شدید با سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (کنترل مثبت). کشت موازی با یک سویه غیرتولیدکننده پیوسیانین به عنوان کنترل منفی.
• کاربرد اصلی: کمک به شناسایی بیوشیمیایی سودوموناس آئروژینوزا در آزمایشگاه تشخیصی، تحقیقات در زمینه عوامل ویرولانس و تولید رنگدانه در سودوموناس.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Pseudomonas Agar P (King A Medium) محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک و دور از نور مستقیم نگهداری شود. برای تهیه محیط، مطابق دستورالعمل در آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم کاملاً هم بزنید. پس از اتوکلاو، اجازه دهید محیط تا حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد سرد شده و سپس در پلیت‌های استریل ریخته شود. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در تاریکی برای مدت کوتاه (حدود یک هفته) نگهداری کرد. قبل از کشت، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. از آنجایی که این محیط غیرانتخابی است، برای جلوگیری از آلودگی، حتماً از کشت خالص استفاده شود. تولید رنگدانه پیوسیانین ممکن است تحت تاثیر دمای انکوباسیون (دمای اتاق یا ۳۰ درجه سانتی‌گراد گاهی نتایج بهتری دارد) و مدت زمان انکوباسیون قرار گیرد. برخی سویه‌ها ممکن است فقط در روز دوم یا سوم رنگدانه تولید کنند. تفسیر نتایج باید هم در نور معمولی و هم تحت نور UV انجام پذیرد. کلونی‌های تولیدکننده پیوسیانین ممکن است گاهی با کلونی‌های کپک اشتباه گرفته شوند، بنابراین مشاهده میکروسکوپی در صورت نیاز توصیه می‌شود. برای شناسایی قطعی، نتایج این تست باید در کنار سایر تست‌های بیوشیمیایی (مانند اکسیداز، رشد در ۴۲ درجه) تفسیر شود.