محیط کشت شیدلر براث بیس 2

محیط کشت براث شِدلِر (Schaedler Anaerobe Broth)

محیط کشت Schaedler Broth یک محیط غنی‌سازی مایع اختصاصی برای بی‌هوازی‌ها است که برای شبیه‌سازی شرایط مغذی و کاهنده موجود در روده بزرگ طراحی شده است. این محیط حاوی ترکیبات بسیار غنی و پیچیده‌ای از جمله پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، هیدرولیزات کازئین، همین (Hemin) و ویتامین K1 است که نیازهای تغذیه‌ایی پیچیده بسیاری از بی‌هوازی‌های سخت‌رشد را برآورده می‌سازد. عامل کلیدی در این محیط، حضور سیستئین هیدروکلراید و اغلب تیوگلیکولات سدیم است که به عنوان عوامل کاهنده قوی عمل کرده و پتانسیل اکسیداسیون-احیا (Eh) محیط را به سرعت پایین می‌آورند و شرایط بی‌هوازی مطلوبی را حتی در ظروف دربسته ایجاد می‌کنند. افزودن دی‌اکسید کربن (به صورت گاز یا از طریق سیستم بافر بیکربنات) اغلب برای بهبود رشد برخی گونه‌ها توصیه می‌شود. این محیط به دلیل غنا و محافظت از بی‌هوازی‌های حساس در برابر اکسیژن، برای غنی‌سازی اولیه نمونه‌های کلینیکی (مانند مایع بدن، بافت)، کشت خون برای بی‌هوازی‌ها (در بطری‌های مخصوص) و نگهداری و تکثیر سویه‌های بی‌هوازی در تحقیقات ایده‌آل است.

کاربرد اصلی آن در میکروبیولوژی تشخیصی بالینی برای کشت بی‌هوازی‌ها از عفونت‌های عمقی (مانند آبسه، عفونت‌های لگنی، زخم) و در تحقیقات میکروبیوم، به ویژه مطالعات مرتبط با فلور روده و بی‌هوازی‌های کمونسال (Commensal) می‌باشد. نسخه آگاردار آن (Schaedler Agar) نیز برای جداسازی کلونی‌ها استفاده می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، بسیار غنی (Rich)، کاهش‌یافته (Reduced)، برای بی‌هوازی‌های مطلق و سخت‌رشد.
• هدف کشت: غنی‌سازی، کشت و نگهداری طیف وسیعی از باکتری‌های بی‌هوازی مطلق، به ویژه گونه‌های سخت‌رشد فلور روده و عوامل بیماری‌زای بی‌هوازی.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود. معمولاً جوشانده شده و سپس بلافاصله تحت جریان گاز بی‌هوازی (مانند نیتروژن) سرد می‌شود تا اکسیژن زدوده شود. اغلب اتوکلاو نمی‌شود یا با احتیاط اتوکلاو می‌گردد تا عوامل کاهنده حفظ شوند.
• ترکیبات کلیدی تغذیه‌ای: هیدرولیزات کازئین، پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، گلوکز، نشاسته قابل حل، نمک‌ها. اغلب حاوی همین (Hemin) و ویتامین K1 به عنوان فاکتورهای رشد ضروری برای بسیاری از بی‌هوازی‌ها.
• ترکیبات کلیدی کاهنده: سیستئین هیدروکلراید (عامل کاهنده اصلی)، گاهی تیوگلیکولات سدیم. این ترکیبات محیط را کاهش‌یافته نگه می‌دارند.
• شرایط گازی: تهیه و نگهداری تحت اتمسفر بی‌هوازی (نیتروژن، دی‌اکسید کربن، هیدروژن) برای حفظ شرایط کاهش‌یافته ضروری است.
• شرایط کشت: کشت در لوله‌ها یا بطری‌های مخصوص کشت خون بی‌هوازی که از قبل کاهش‌یافته و تحت گاز بی‌هوازی پر شده‌اند.
• شرایط انکوباسیون: در شرایط بی‌هوازی مطلق (چمبر بی‌هوازی یا بطری‌های دربسته مخصوص) در دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت حداقل ۴۸ ساعت تا ۵ روز یا بیشتر (برای گونه‌های کندرشد).
• خوانش نتیجه: مثبت (رشد): ایجاد کدورت، تولید گاز (ممکن است در لوله‌های خاصی مشاهده شود)، تغییر رنگ (در صورت وجود اندیکاتور)، یا بوی خاص. سپس باید زیرکشت بر روی محیط جامد بی‌هوازی (مانند Schaedler Agar با خون) انجام شود. منفی: عدم کدورت.
• کنترل کیفیت: رشد خوب با سویه‌های بی‌هوازی مانند Bacteroides fragilis ATCC 25285 یا Clostridium perfringens ATCC 13124 (کنترل مثبت). عدم رشد با سویه هوازی اجباری مانند Pseudomonas aeruginosa (کنترل منفی).
• کاربرد اصلی: کشت خون برای بی‌هوازی‌ها (در سیستم‌های کشت خون اتوماتیک یا دستی)، غنی‌سازی نمونه‌های بالینی مشکوک به عفونت بی‌هوازی، و تحقیقات میکروبیوم روده و مطالعات بی‌هوازی‌های سخت‌رشد.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Schaedler Broth Base محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. تهیه این محیط نیازمند دقت بالا برای حفظ شرایط بی‌هوازی است. معمولاً پودر در آب مقطر جوشانده می‌شود تا اکسیژن محلول خارج گردد، سپس بلافاصله تحت جریان گاز بی‌هوازی (مانند مخلوط ۸۰٪ نیتروژن، ۱۰٪ دی‌اکسید کربن، ۱۰٪ هیدروژن) سرد شده و به ظروف استریل منتقل می‌شود. ظروف باید به گونه‌ای پر شوند که فضای هوای حداقل باقی بماند و با درپوش‌های محکم بسته شوند. برای استفاده در سیستم کشت خون، از بطری‌های تجاری پیش‌کاهش‌یافته و حاوی محیط Schaedler استفاده می‌شود. هرگز نباید محیط را به طور معمول در معرض هوا قرار داد یا به مدت طولانی ذخیره کرد، زیرا عوامل کاهنده اکسید می‌شوند. محیط آماده شده باید بلافاصله استفاده شود یا در شرایط بی‌هوازی و در تاریکی نگهداری گردد. هنگام کشت نمونه، تزریق نمونه به بطری باید با حداقل ورود هوا انجام شود. انکوباسیون طولانی‌مدت (حتی تا ۱۴ روز) برای برخی بی‌هوازی‌های کندرشد ممکن است لازم باشد. پس از مشاهده رشد، کشت بر روی محیط جامد باید در داخل چمبر بی‌هوازی انجام گیرد. از آنجایی که این محیط بسیار غنی است، ممکن است رشد برخی میکروارگانیسم‌های هوازی اختیاری (Facultative) را نیز در شرایط بی‌هوازی پشتیبانی کند، بنابراین تفسیر نتایج باید همراه با کشت روی محیط‌های انتخابی باشد.