محیط کشت فراسر لیستریا سلکتیو انریچمنت براث بیس 2

محیط کشت براث غنی‌کننده انتخابی لیستریا فریزر (Fraser Broth)

محیط کشت Fraser Listeria Selective Enrichment Broth Base یک محیط مایع دو مرحله‌ای (نیمه‌انتخابی و سپس کاملاً انتخابی) است که در استانداردهای بین‌المللی مانند ISO 11290 و FDA/BAM برای تشخیص Listeria monocytogenes در غذا و محیط توصیه شده است. پایه این محیط حاوی منابع مغذی (پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت) برای حمایت از رشد لیستریا، و همچنین لیتیم کلرید و اسفالتین است که به عنوان عوامل انتخابی اولیه عمل می‌کنند. پس از افزودن مکمل فریزر (حاوی نالیدیکسیک اسید و اکولین)، محیط به مرحله کاملاً انتخابی وارد می‌شود. اکولین یک ماده کلیدی است که سویه‌های لیستریا (به جز L. ivanovii) آن را به اسکولین و گلوکز هیدرولیز می‌کنند. محصول این واکنش با نمک‌های آهن موجود در محیط ترکیب شده و ایجاد یک رنگ سیاه مشخص در محیط می‌کند که یک شاخص اولیه مهم برای حضور احتمالی لیستریا است.

کاربرد اصلی این محیط در صنایع غذایی، آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت و مراکز بهداشتی برای غنی‌سازی انتخابی نمونه‌های غذایی (مانند لبنیات، گوشت، سبزیجات) و نمونه‌های محیطی قبل از کشت روی محیط‌های جامد انتخابی مانند Oxford Agar یا PALCAM Agar است. استفاده از آن باعث افزایش حساسیت روش و کاهش احتمال نتایج منفی کاذب می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی و غنی‌کننده (Enrichment Broth) در دو فاز
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی و تشخیص اولیه باکتری‌های جنس Listeria (به ویژه L. monocytogenes) از نمونه‌های غذایی و محیطی
• حالت فیزیکی: پودر (حل شده در آب مقطر، توزیع، اتوکلاو و سپس افزودن مکمل استریل فیلترشده)
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، سدیم فسفات، پتاسیم فسفات، لیتیم کلرید، اسفالتین، آهن (III) آمونیوم سیترات
• مکمل ضروری (Fraser Supplement): نالیدیکسیک اسید (عامل انتخابی علیه گرم‌منفی‌ها)، اکولین (سوبسترای هیدرولیز برای تولید رنگ سیاه)
• اصول آزمون: عوامل انتخابی (لیتیم کلرید، اسفالتین، نالیدیکسیک اسید) رشد فلور رقیب (به ویژه انتروباکتریاسه و کوکسی‌های گرم مثبت) را مهار می‌کنند. لیستریا قادر به رشد و هیدرولیز اکولین است که منجر به تشکیل رنگ سیاه در محیط می‌شود.
• شرایط کشت: نمونه غذایی (معمولاً ۲۵ گرم) به حجم مشخصی از محیط پایه (پس از اتوکلاو و خنک شدن) تلقیح می‌شود. پس از ۲۴-۲۶ ساعت انکوباسیون اولیه، از این کشت اولیه به لوله حاوی محیط پایه + مکمل کامل فریزر (مرحله دوم) تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴-۲۶ ساعت برای مرحله اول (نیمه‌انتخابی) و سپس ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴-۴۸ ساعت برای مرحله دوم (کاملاً انتخابی).
• خوانش نتیجه: مثبت اولیه برای لیستریا: سیاه شدن محیط در مرحله دوم (ناشی از هیدرولیز اکولین). این نتیجه باید با کشت روی محیط جامد انتخابی و انجام تست‌های تأییدی دنبال شود. منفی: عدم تغییر رنگ (زرد/کهربایی باقی می‌ماند).
• کنترل کیفیت: سویه Listeria monocytogenes ATCC 19115: رشد خوب و سیاه شدن محیط. سویه Escherichia coli ATCC 25922: مهار رشد یا رشد ضعیف بدون سیاه شدن.
• کاربرد اصلی: روش استاندارد در میکروبیولوژی غذایی برای غنی‌سازی و تشخیص اولیه Listeria spp. و L. monocytogenes مطابق با استانداردهای ISO، FDA و USDA.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Fraser Broth Base و مکمل خشک آن از ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و زیر ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کنید. مکمل را طبق دستورالعمل در حلال مناسب (معمولاً اتانول/آب) حل کرده و به صورت استریل فیلتر کنید. مکمل استریل باید به محیط پایه استریل و خنک شده (دمای حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد) اضافه شود. هرگز مکمل را همراه با پایه اتوکلاو نکنید. حجم توصیه شده برای کشت اولیه معمولاً ۱۰ میلی‌لیتر است. فرآیند دو مرحله‌ای (نیمه‌انتخابی سپس انتخابی) برای کاهش استرس باکتری و افزایش بازیابی سلول‌های آسیب دیده (آسیب دیده حرارتی یا تحت استرس) حیاتی است. تغییر رنگ به سیاه معمولاً در قسمت زیرین لوله شروع می‌شود و به سمت بالا گسترش می‌یابد. سیاهی جزئی یا تاخیر در تغییر رنگ ممکن است رخ دهد. کلیه نمونه‌های مشکوک (حتی با سیاهی خفیف) باید روی محیط‌های جامد انتخابی (مانند Oxford Agar) کشت داده شوند. دوره انکوباسیون نباید از ۴۸ ساعت در مرحله دوم تجاوز کند، زیرا ممکن است باکتری‌های غیرلیستریا نیز شروع به رشد کنند. برای نمونه‌های بسیار آلوده، ممکن است رقت بیشتری از کشت اولیه (مثلاً ۱:۱۰۰) در مرحله دوم مورد نیاز باشد. از پیپت‌های استریل برای انتقال بین مراحل استفاده کنید. تمام کشت‌های لیستریا باید با احتیاط و تحت شرایط ایمنی زیستی مناسب انجام شوند.