محیط کشت فلوئید تایوگلیکولات مدیوم با بف اکسترکت 3

محیط کشت تیوگلیکولات مایع با عصاره گوشت (Fluid Thioglycollate Medium)

محیط کشت Fluid Thioglycollate Medium with Beef Extract یک محیط مایع چندکاره است که به دلیل فرمولاسیون ویژه خود امکان کشت باکتری‌های با نیازهای مختلف اکسیژنی را فراهم می‌کند. کلید عملکرد این محیط، وجود تیوگلیکولات سدیم و سبز متیلن یا رزازورین است. تیوگلیکولات به عنوان یک عامل کاهنده قوی عمل کرده و اکسیژن محلول در محیط را حذف می‌کند و شرایط بیهوازی در عمق لوله ایجاد می‌نماید. حضور مقدار کم آگار (۰.۰۷۵٪) از همرفت و اختلال در لایه‌های اکسیژنی جلوگیری می‌کند و باعث ایجاد یک گرادیان اکسیژن از سطح (هوازی) به عمق (بیهوازی) می‌شود. رنگ‌آمیزی سبز متیلن یا رزازورین به عنوان نشانگر ردوکس عمل کرده و مناطق فاقد اکسیژن را بی‌رنگ می‌کند. افزودن عصاره گوشت (Beef Extract) و کازآمینو اسیدها منبع غنی از نیتروژن، ویتامین‌ها و مواد معدنی را فراهم می‌آورد که رشد حتی باکتری‌های سخت‌گیر را تقویت می‌نماید.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت داروها و مواد پزشکی (تست استریلیتی USP/EP)، کشت خون، جداسازی و نگهداری باکتری‌های بیهوازی و نیز به عنوان محیط پایه برای تست‌های تخمیر قندها می‌باشد. توانایی آن در حمایت از رشد هر پنج گروه باکتریایی (هوازی اجباری، بیهوازی اجباری، هوازی‌بیهوازی اختیاری، میکروآئروفیل و بیهوازی هوادوست) آن را به یک محیط استاندارد جهانی تبدیل کرده است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع نیمه‌جامد (حاوی آگار کم)، چندمنظوره برای انواع نیازهای اکسیژنی
• هدف کشت: کشت گسترده میکروارگانیسم‌های هوازی، بیهوازی و میکروآئروفیل؛ به ویژه برای تست استریلیتی و کشت نمونه‌های بالینی
• حالت فیزیکی: پودر (حل شده در آب مقطر، جوشانده برای حذف اکسیژن اولیه، توزیع در لوله‌ها و سپس اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: کازآمینو اسیدها، عصاره مخمر، عصاره گوشت (Beef Extract)، دکستروز، تیوگلیکولات سدیم، کلرید سدیم، آرژینین، سبز متیلن یا رزازورین، آگار (مقدار کم)
• اصول عملکرد: ایجاد گرادیان اکسیژن. تیوگلیکولات شرایط بیهوازی حفظ می‌کند. آگار کم از همرفت جلوگیری می‌کند. نشانگر ردوکس (بی‌رنگ شدن در ناحیه بیهوازی) وضعیت محیط را بصری نشان می‌دهد.
• شرایط کشت: لوله‌ها باید تازه آماده یا حرارت داده شده و سریع خنک شده باشند تا اکسیژن اضافی خارج شود. نمونه به عمق محیط (برای بیهوازی‌ها) و نزدیک سطح (برای هوازی‌ها) تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: معمولاً ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۴ روز برای تست استریلیتی، یا ۲۴ تا ۷۲ ساعت برای کشت معمولی. باید به صورت ایستاده انکوبه شوند.
• خوانش نتیجه: رشد باکتری به صورت کدورت، رسوب، پلت یا تغییر رنگ نشانگر (به بی‌رنگی) مشاهده می‌شود. محل رشد در لوله نشان دهنده نیاز اکسیژنی ارگانیسم است (رشد در سطح= هوازی، در عمق= بیهوازی، در سرتاسر لوله= هوازی-بیهوازی اختیاری).
• کنترل کیفیت: سویه Clostridium sporogenes ATCC 19404 (بیهوازی اجباری): رشد خوب در عمق. سویه Staphylococcus aureus ATCC 6538 (هوازی-بیهوازی اختیاری): رشد در سرتاسر لوله. سویه Bacteroides fragilis ATCC 25285 (بیهوازی): رشد در عمق.
• کاربرد اصلی: تست استریلیتی محصولات پزشکی و دارویی (USP <71>، EP 2.6.1)، کشت خون و مایعات بدن غنی از مواد مغذی، نگهداری سویه‌های بیهوازی، و غربالگری اولیه میکروارگانیسم‌ها از نمونه‌های پیچیده.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط Fluid Thioglycollate Medium with Beef Extract ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک و دور از نور نگهداری کنید. برای تهیه محیط، پودر را در آب مقطر جوشانده تا اکسیژن اولیه خارج شود، سپس سریع در لوله‌ها توزیع و بلافاصله اتوکلاو نمایید. پس از اتوکلاو، لوله‌ها را به سرعت در حمام آب سرد قرار دهید تا سرد شده و از ورود مجدد اکسیژن به عمق جلوگیری شود. لوله‌های آماده را می‌توان به صورت ایستاده در دمای ۲۰ تا ۲۵ درجه سانتی‌گراد و دور از نور به مدت محدود نگهداری کرد. قبل از استفاده، لوله‌ها را از نظر بی‌رنگی نشانگر در عمق (نشانه شرایط بیهوازی مناسب) بررسی کنید. اگر بیش از یک سوم بالای لوله رنگی شده باشد، باید محیط را قبل از استفاده حرارت داد و سریع سرد کرد. برای کشت، از پیپت یا لوپ کشت بلند برای تلقیح نمونه به عمق لوله استفاده نمایید. برای تست استریلیتی، دوره انکوباسیون و دمای آن دقیقاً مطابق با فارماکوپه (معمولاً ۱۴ روز در ۳۰-۳۵ درجه سانتی‌گراد) باشد. از لوله‌های درب پیچ‌دار یا پنبه‌ای استفاده شده و آنها را محکم ببندید تا از تبخیر جلوگیری شود. بررسی روزانه لوله‌ها از نظر نشانه‌های رشد ضروری است. محیط استفاده شده را طبق دستورالعمل بی‌خطرسازی مواد آلوده به میکروارگانیسم‌ها دفع نمایید.