محیط کشت فلوئید تایوگلیکولات مدیوم 2

محیط کشت ایندول نیتریت (Trypticase Nitrate Broth)

محیط کشت Indole Nitrite Medium که با نام Trypticase Nitrate Broth نیز شناخته می‌شود، یک محیط مایع چندکاره است. این محیط حاوی تریپتیکاز پپتون است که به میزان کافی تریپتوفان دارد؛ تریپتوفان سوبسترای لازم برای تست ایندول است. برخی باکتری‌ها آنزیم تریپتوفاناز را تولید می‌کنند که تریپتوفان را به ایندول، پیرووات و آمونیاک تجزیه می‌کند. در عین حال، محیط حاوی نیترات پتاسیم (KNO₃) است که سوبسترای تست احیای نیترات محسوب می‌شود. در این تست، توانایی باکتری در احیای نیترات (NO₃⁻) به نیتریت (NO₂⁻) یا فرآورده‌های گازی دیگر (مانند N₂) ارزیابی می‌گردد. پس از دوره انکوباسیون، معرف‌های جداگانه به محیط اضافه می‌شوند: برای شناسایی ایندول از معرف کواک (Kovac’s) یا اهرلیخ (Ehrlich’s) و برای شناسایی نیتریت از معرف‌های سولفانیلیک اسید و آلفا-نفتیل آمین استفاده می‌شود.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی، تشخیصی و تحقیقاتی برای شناسایی و تمایز اعضای خانواده انتروباکتریاسه و سایر باکتری‌های گرم منفی است. امکان انجام دو تست در یک محیط، صرفه‌جویی در زمان و مواد را به دنبال دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، چندمنظوره برای تست‌های بیوشیمیایی
• هدف کشت: انجام همزمان دو تست تشخیصی: تست ایندول و تست احیای نیترات برای شناسایی باکتری‌ها
• حالت فیزیکی: پودر (حل شده در آب مقطر، در لوله‌ها توزیع و اتوکلاو می‌شود)
• ترکیبات کلیدی: تریپتیکاز پپتون (منبع تریپتوفان)، پپتون، نیترات پتاسیم (KNO₃)، دی‌پتاسیم فسفات (بافر)
• اصول آزمون: 1) تست ایندول: باکتری‌های تریپتوفاناز-مثبت ایندول تولید می‌کنند که با معرف کواک واکنش داده و حلقه قرمز تشکیل می‌دهد. ۲) تست احیای نیترات: باکتری‌های حاوی آنزیم نیترات ردوکتاز، نیترات را به نیتریت احیا می‌کنند که با معرف‌ها ایجاد رنگ قرمز/صورتی می‌کند. عدم رنگ‌گیری نیاز به تست تأییدی با پودر روی دارد.
• شرایط کشت: لوله محیط با یک کلنی یا سوسپانسیون خالص از باکتری تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت (گاهی تا ۴۸ ساعت برای برخی گونه‌ها).
• خوانش نتیجه: ایندول مثبت: تشکیل حلقه قرمز پس از افزودن معرف کواک. نیتریت مثبت: ایجاد رنگ قرمز بلافاصله پس از افزودن معرف‌های نیتریت. نیتریت منفی: عدم رنگ‌گیری که مستلزم افزودن پودر روی است. تست روی مثبت (نیترات احیا نشده): ایجاد رنگ قرمز پس از افزودن پودر روی (نتیجه نهایی منفی). تست روی منفی (احیا به فرآورده‌های گازی): عدم رنگ‌گیری حتی پس از افزودن پودر روی (نتیجه نهایی مثبت).
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922: ایندول مثبت، نیتریت مثبت. سویه Acinetobacter baumannii ATCC 19606: ایندول منفی، نیتریت منفی (نیترات احیا نشده). سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: ایندول منفی، احیای نیترات به گاز (نیتریت منفی، تست روی منفی).
• کاربرد اصلی: شناسایی و تمایز باکتری‌های گرم منفی (به ویژه انتروباکتریاسه) و برخی گرم مثبت‌ها در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی بالینی و تشخیصی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط Indole Nitrite Medium ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. پس از اتوکلاو و سرد شدن، محیط را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری نمود. قبل از تلقیح، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. توصیه می‌شود برای هر ارگانیسم دو لوله کشت داده شود: یکی برای تست ایندول (پس از ۲۴ ساعت) و دیگری برای تست نیترات (که ممکن است نیاز به انکوباسیون ۴۸ ساعته داشته باشد). برای تست ایندول، حدود ۰.۲ تا ۰.۵ میلی‌لیتر معرف کواک به لوله کشت اضافه کرده و به آرامی تکان دهید. تشکیل حلقه قرمز در سطح، نشانه مثبت است. برای تست نیترات، ابتدا چند قطره از معرف سولفانیلیک اسید و سپس آلفا-نفتیل آمین اضافه کنید. در صورت منفی بودن (عدم رنگ‌گیری)، مقدار کمی پودر روی اضافه نموده و مجدداً بررسی کنید. نکته حیاتی: ایجاد رنگ قرمز پس از افزودن پودر روی نشان می‌دهد که نیترات هنوز در محیط موجود است (یعنی باکتری آن را احیا نکرده) و نتیجه نهایی منفی است. اگر پس از افزودن پودر روی نیز رنگی ایجاد نشود، نشان‌دهنده احیای کامل نیترات به فرآورده‌های گازی مانند نیتروژن (N₂) است که نتیجه آن مثبت محسوب می‌شود. از معرف‌های تازه و با تاریخ انقضای معتبر استفاده کنید. کار با پودر روی باید با احتیاط انجام شود.